自身免疫介导的干眼病角膜中的免疫景观与细胞间交互

目的：本研究旨在全面表征自发性自身免疫介导的干眼病（DED）小鼠模型中驻留和浸润免疫细胞的身份与信号谱，以及它们与非免疫细胞的相互作用。方法：通过全片免疫荧光分析野生型（WT）和自身免疫调节因子缺陷（Aire−/−）小鼠的角膜组织，以确定免疫细胞组成及在角膜缘和中央角膜的空间分布。使用单细胞RNA测序（scRNA-seq）进一步表征免疫细胞身份和细胞间通讯。使用CellChat分析免疫细胞、上皮细胞和基质细胞之间的细胞间信号通路。结果：免疫荧光显示，与WT对照相比，Aire−/−角膜中CD3⁺和CD4⁺ T细胞、CD45R⁺ B细胞和IBA1⁺巨噬细胞广泛浸润。scRNA-seq鉴定出多种免疫亚群，包括细胞毒性T细胞、γδ17细胞、调节性T细胞、NK T细胞、B细胞、浆细胞和多种巨噬细胞亚型。单核细胞衍生的巨噬细胞表现出独特的转录程序，包括促炎和抗原呈递表型，CD40至CD40L信号连接T细胞、B细胞和巨噬细胞。CellChat分析显示，与免疫激活、炎症、凋亡和免疫耐受丧失相关的信号通路协同上调。此外，Aire−/−角膜中的上皮细胞和角膜细胞上调抗原呈递和促炎基因特征，表明非免疫细胞积极参与免疫激活和募集。结论：单细胞转录组学揭示了Aire−/−角膜中一个复杂的、多细胞的炎症环境，涉及多种免疫亚群以及活化的驻留上皮细胞和基质细胞。这些发现提示非T细胞机制参与了慢性干眼病的发病机制，并可能解释了目前美国食品药品监督管理局（FDA）批准的靶向T细胞疗法疗效有限的原因。对这些多细胞相互作用和信号通路的进一步表征可能有助于为自身免疫介导的干眼病开发更广泛的治疗策略。