Identification of Apically Localized Endogenous Dental Pulp Stem Cells
单细胞转录组分析、体内谱系追踪（9个月）、牙髓损伤模型及肾被膜移植功能验证等多层级证据。
小鼠磨牙牙髓细胞（单细胞RNA测序数据GSM4365611） Axin2GFP及Axin2Cre-Dox; R26tdTomato谱系追踪小鼠 牙髓暴露和深部损伤小鼠模型 肾被膜移植模型（SCID小鼠）
谱系追踪时长：0天、3个月、9个月；多西环素诱导剂量2 mg/mL加蔗糖50 mg/mL，连续3天 牙髓损伤模型：上颌第一磨牙，用圆 steel bur 钻孔，以#6 K-file暴露或深部损伤至根尖，玻璃离子水门汀封闭 肾被膜移植细胞数量：5,000个未经分选或纯化的牙髓细胞 样本量：各时间点n=3，统计方法为双侧Student's t检验 检测终点：H&E染色、tdTomato免疫染色、细胞标志物（Dcn、Stc、Adgrl4、Dmp1）共定位
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
unbiasedly identify cell subpopulations in mouse molar dental pulp and identify potential stem cell populations
分析小鼠磨牙牙髓细胞单细胞RNA测序数据（GSM4365611），使用Seurat包进行降维和聚类，使用destiny R包建模5个牙髓细胞群体的分化轨迹，基于标志基因注释细胞类型。
确定Axin2表达细胞在磨牙牙髓中的空间定位
使用Axin2GFP（Axin2rtTA; TRE-H2BGFP）小鼠，多西环素诱导后通过荧光成像检测Axin2表达细胞定位。
验证Axin2+细胞是否满足成体干细胞标准（自我更新和持续产生成熟细胞类型）
构建Axin2Cre-Dox; R26tdTomato小鼠，多西环素诱导后在不同时间点（0天、3个月、9个月）通过tdTomato免疫染色追踪Axin2 lineage细胞的扩增和分化，共染PC1、PC2、OD标志物。
探究Axin2+ DPSCs在牙髓损伤修复和修复性牙本质形成中的作用
对Axin2Cre-Dox; R26tdTomato小鼠进行牙髓暴露或深部损伤手术，术后3天和28天通过H&E染色和tdTomato免疫染色检测修复性牙本质形成和Axin2 lineage细胞扩增及分化。
验证分离的Axin2+牙髓细胞是否具有再生牙髓组织和修复性牙本质的能力
从P28 Axin2Cre-Dox; R26tdTomato小鼠磨牙分离牙髓细胞（经3天多西环素处理），将5,000个未分选细胞移植到SCID小鼠肾被膜下，4周后通过全mount荧光成像、H&E染色和免疫染色检测再生组织。
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| Axin2+细胞定位和谱系追踪 | 多西环素诱导方案：2 mg/mL加蔗糖50 mg/mL，P28开始连续3天；谱系追踪时间点：0天、3个月、9个月 阅读提示：Results 'Stemness of Axin2+ Dental Pulp Cells' 及 Figure 2A |
| 牙髓损伤模型 | 手术牙位（上颌第一磨牙）、损伤方式（圆 steel bur钻孔， #6 K-file暴露或深部损伤至根尖）、封闭材料（玻璃离子水门汀）、术后检测时间点（3天和28天） 阅读提示：Results 'Axin2+ Dental Pulp Cells Respond to Pulp Exposure and Injury' 及 Figure 3A-B |
| 肾被膜移植 | 移植细胞数（5,000个未分选牙髓细胞）、受体小鼠品系（SCID）、移植部位（肾被膜下）、检测时间（4周） 阅读提示：Results 'Regenerative Ability of the Isolated Axin2+ DPSCs' 及 Figure 5A |
| 统计分析和样本量 | 样本量n=3，双侧Student's t检验，数据以mean±SD表示；未使用随机化、盲法或预先样本量计算 阅读提示：Materials and Methods 'Transcriptomic analysis, statistics, and reproducibility' 及 Figure 2E、3H、3O图注 |
