患者皮损组织采集与分期定义
获取早期和晚期HS皮损组织，明确疾病分期以比较不同阶段免疫微环境。
采集8例早期HS（Hurley 1期，炎性结节，无真皮隧道或纤维化）和7例晚期HS（Hurley 3期，存在隧道和瘢痕/纤维化）患者活动性皮损活检组织，并收集聚合性痤疮和银屑病组织作为对照。
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空间转录组学揭示化脓性汗腺炎中早期B细胞和T细胞激活
Spatial transcriptomics maps early B-cell and T-cell activation in hidradenitis suppurativa
实验完整度
高整合空间转录组（156个ROI）与单细胞转录组独立队列，比较早晚期HS及痤疮、银屑病，并含免疫组化验证。
主要模型
早期化脓性汗腺炎患者皮损活检组织（Hurley 1期，8例） 晚期化脓性汗腺炎患者皮损活检组织（Hurley 3期，7例） 聚合性痤疮患者皮损组织 银屑病皮损及非皮损组织
重点核对
早期HS定义为无真皮隧道或纤维化的炎性结节（Hurley 1期），晚期HS定义为存在隧道和瘢痕/纤维化（Hurley 3期） 空间转录组学感兴趣区域（ROI）的选取与分组：表皮上皮、真皮上皮、浅表真皮炎症聚集区、深部真皮炎症聚集区 差异表达分析阈值：FCH > 2 或 FCH < 0.5 且 FDR < 0.05 单细胞转录组：早期HS n = 2345，晚期HS n = 21,717，银屑病皮损 n = 92,697，非皮损 n = 37,391，对照 n = 15,461 免疫组化验证：CD3、CD20染色及CXCL13蛋白表达
摘要
化脓性汗腺炎是一种慢性、使人衰弱的炎症性皮肤病，从早期阶段的浅表结节进展为晚期病变中的真皮隧道、三级淋巴结构和纤维化。真皮隧道角质形成细胞、三级淋巴结构和成纤维细胞之间的相互作用促进晚期疾病中致病性T细胞和B细胞炎症。然而，这些免疫激活是依次先于还是后于晚期结构形成尚不清楚。为描绘免疫激活的时间顺序，我们整合了早期和晚期化脓性汗腺炎的空间和单细胞转录组分析，并将其与聚合性痤疮和银屑病进行比较。156个感兴趣区域的空间转录组学显示，早期化脓性汗腺炎中存在强烈的真皮免疫激活，包括B细胞富集、17型T细胞通路激活和中性粒细胞浸润，这些发生在隧道或三级淋巴结构形成之前。单细胞RNA测序证实了早期浆细胞扩增，并鉴定了表达促炎细胞因子、抗原呈递机制和免疫球蛋白的多功能B细胞。值得注意的是，在早期病变中，T细胞而非成纤维细胞是B细胞趋化因子CXCL13的主要生产者。总之，这些发现表明化脓性汗腺炎表现出早期和持续的免疫激活，先于真皮重塑，强调了其从发病起就具有侵袭性，并提示早期靶向17型T细胞轴和B细胞介导的炎症可能有助于预防疾病进展。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 在化脓性汗腺炎中，T细胞和B细胞的免疫激活是依次先于还是后于晚期结构（真皮隧道、三级淋巴结构、纤维化）的形成？
- 核心机制
- 早期HS即存在由T细胞来源CXCL13驱动的B细胞富集和浆细胞扩增，以及17型T细胞通路激活和中性粒细胞浸润，形成先于真皮重塑的持续免疫激活。
- 主要证据
- 156个ROI的空间转录组学显示早期HS真皮免疫激活包括B细胞富集、T17通路和中性粒细胞浸润；单细胞RNA测序独立队列证实早期浆细胞扩增和B细胞多功能表型；免疫组化验证CD20阳性B细胞及T细胞来源CXCL13。
- 研究意义
- 提示早期靶向17型T细胞轴和B细胞介导的炎症可能有助于预防疾病进展，需未来前瞻性试验验证。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
空间转录组学分析
在空间层面描绘早期和晚期HS不同区域（表皮上皮、真皮上皮、浅表/深部真皮炎症聚集区）的基因表达特征。
对早期和晚期HS组织切片进行空间转录组学检测，选取156个ROI，包括表皮上皮、真皮上皮、浅表真皮炎症聚集区和深部真皮炎症聚集区，进行比较和差异表达分析。
单细胞转录组学验证
在单细胞水平验证空间转录组学发现，解析免疫细胞组成和差异表达基因。
对早期HS（n=2345）、晚期HS（n=21,717）、银屑病皮损（n=92,697）和非皮损（n=37,391）以及对照（n=15,461）皮肤进行单细胞RNA测序，分析细胞比例和差异表达基因。
免疫组化验证
验证空间和单细胞转录组学发现的B细胞浸润及CXCL13蛋白表达。
对早期和晚期HS组织进行CD3和CD20染色，以及CXCL13蛋白免疫组化分析，观察T细胞、B细胞聚集和CXCL13空间分布。
配体-受体相互作用分析
探究HS中免疫细胞之间的功能性相互作用，特别是B细胞和浆细胞与其他免疫亚群的通讯。
分析HS中比银屑病更 elevated 的免疫细胞间配体-受体相互作用，鉴定CXCR5–CXCL13和IL16–CD4等相互作用。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者皮损组织采集与分期 | 早期HS定义：Hurley 1期，炎性结节，无真皮隧道或纤维化；晚期HS定义：Hurley 3期，存在隧道和瘢痕/纤维化；样本量：早期n=8，晚期n=7；对照：聚合性痤疮和银屑病组织 阅读提示：Materials and Methods第一段；Supplementary Figure S1；Supplementary Table S1 |
| 空间转录组学ROI选取与分组 | ROI总数156个；ROI类型：表皮上皮、真皮上皮、浅表真皮炎症聚集区、深部真皮炎症聚集区；差异表达阈值：FCH > 2 或 FCH < 0.5 且 FDR < 0.05 阅读提示：Figure 1、Figure 2a、Figure 3a、Figure 4；Supplementary Methods中空间转录组实验细节 |
| 单细胞转录组学队列与细胞比例 | 早期HS n=2345，晚期HS n=21,717，银屑病皮损 n=92,697，非皮损 n=37,391，对照 n=15,461；所有单细胞文库由同一研究者使用相同实验方案生成；细胞比例计算仅限免疫细胞 compartment 阅读提示：Figure 5a-c；Supplementary Methods中单细胞转录组实验细节；Supplementary Table S3 |
| 免疫组化与CXCL13验证 | CD3和CD20染色用于鉴定T细胞和B细胞聚集；CXCL13蛋白表达在早期HS的T细胞富集炎症聚集区，晚期HS呈弥漫性、基质相关染色模式；抗体来源和稀释比例：文中未明确说明 阅读提示：Supplementary Figure S2、Supplementary Figure S5；Materials and Methods |
| 配体-受体相互作用分析 | 分析HS中比银屑病更 elevated 的免疫细胞间相互作用；鉴定CXCR5–CXCL13和IL16–CD4； adjusted P < .05 阅读提示：Supplementary Figure S3；Results中单细胞转录组学验证部分 |