细胞迁移检测
评估红景天苷对细胞迁移的影响
采用伤口愈合实验和Transwell迁移实验,检测红景天苷处理后的WRO和Nthy-ori 3-1细胞迁移能力。
Salidroside inhibits migration and invasion of poorly differentiated thyroid cancer cells.
包含体外细胞实验(伤口愈合、Transwell、流式细胞术)和分子机制验证(qRT-PCR、Western blot),但缺乏动物实验和患者样本验证。
WRO人低分化甲状腺癌细胞系 Nthy-ori 3-1人正常甲状腺滤泡上皮细胞系
红景天苷浓度:0、10、20、40 μg/mL 处理时间:72小时(迁移/侵袭) 细胞接种密度:1×10^5 cells/well(伤口愈合) 基质胶浓度:100 μg/cm2(侵袭实验) 统计方法:one-way ANOVA或two-tailed Student's t-test,P<0.05
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估红景天苷对细胞迁移的影响
采用伤口愈合实验和Transwell迁移实验,检测红景天苷处理后的WRO和Nthy-ori 3-1细胞迁移能力。
评估红景天苷对细胞侵袭能力的影响
采用Matrigel包被的Transwell侵袭实验,检测红景天苷处理后的细胞侵袭能力。
探究红景天苷对MMP2和MMP9表达的影响
通过qRT-PCR和Western blot检测红景天苷处理后的WRO细胞中MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达水平。
探究红景天苷对JAK2/STAT3磷酸化活化的影响
通过Western blot检测红景天苷处理后的WRO细胞中pJAK2、JAK2、pSTAT3、STAT3的蛋白水平。
评估红景天苷对细胞凋亡的影响
采用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测凋亡率,并通过Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase 3和Bcl-2的表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | PRIM1640培养基 | Gibco | -- |
| 青霉素-链霉素溶液 | Gibco | -- | |
| 胰蛋白酶-EDTA | Gibco | -- | |
| 胎牛血清 | Lonsera | -- | |
| 药物处理 | 红景天苷 | Tauto Biotech | E-0069 |
| 细胞凋亡检测 | Annexin V凋亡检测试剂盒 | NeoBioscience | -- |
| Western blot | 兔抗MMP9 | Abcam | ab38898 |
| 抗pSTAT3 (Tyr705) | Abcam | ab76315 | |
| 抗STAT3 | Abcam | ab68153 | |
| 抗JAK2 | Abcam | ab108596 | |
| 抗pJAK2 (Y1007+Y1008) | Abcam | ab32101 | |
| 兔抗MMP2 | Affinity | AF0577 | |
| 小鼠抗Bcl-2 (C-2) | Santa Cruz Biotechnology | sc-7382 | |
| 兔抗Bax | Servicebio | GB11007 | |
| 兔抗cleaved caspase 3 | Cell Signaling Technology | 9664 | |
| 小鼠抗β-肌动蛋白 | OriGene | LocusID60 | |
| 兔抗GAPDH | Proteintech | 10494-1-AP | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG二抗 | Proteintech | SA00001-2 | |
| RNA提取 | Trizol试剂 | TaKaRa | -- |
| RT-qPCR | 第一链cDNA合成试剂盒 | TaKaRa | -- |
| SYBR Green qPCR预混液 | GenStar | -- | |
| ABI PRISM 7500实时荧光定量PCR系统 | Applied Biosystems | -- | |
| Transwell实验 | 24孔细胞培养插入小室 | Corning | -- |
| 基质胶 | BD | -- | |
| Western blot | 增强型ECL化学发光系统 | Millipore | -- |
| 伤口愈合实验 | 光学显微镜 | Leica | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养 | 细胞系WRO和Nthy-ori 3-1的来源和培养条件(培养基、血清浓度、抗生素浓度、CO2浓度) 阅读提示:Methods中的Cell culture部分 |
| 药物处理 | 红景天苷的浓度(0, 10, 20, 40 μg/mL)和处理时间(72小时) 阅读提示:Methods中的Wound-healing assay、Transwell实验和凋亡分析部分 |
| 迁移和侵袭实验 | 细胞接种密度、Transwell小室孔径、基质胶浓度、培养时间 阅读提示:Methods中的Transwell migration and invasion assays部分 |
| 分子检测 | qRT-PCR引物序列、Western blot抗体稀释比例 阅读提示:Methods中的RNA extraction和Western blot部分 |
| 统计方法 | 统计分析方法(one-way ANOVA或t检验)和显著性水平(P<0.05) 阅读提示:Methods中的Statistical analysis部分 |