苏木乙酸乙酯提取物通过调节miR-126/VEGF信号通路调控动脉粥样硬化中的血管生成

研究目的：基于miR-126/VEGF信号通路，探讨苏木乙酸乙酯提取物（CSEAE）对动脉粥样硬化（AS）血管生成的调控机制。材料与方法：本研究首先利用美国国家生物技术信息中心（NCBI）基因表达综合（GEO）公共数据库和R语言软件筛选与AS相关的差异表达microRNAs（miRNAs）。随后，利用“TargetScan”网站和双荧光素酶报告基因实验验证了miR-126与血管内皮生长因子（VEGF）在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中的靶向调控关系。在细胞实验中，利用细胞增殖实验和流式细胞术评估CSEAE含药血清对HUVECs增殖和凋亡的影响。在动物实验中，利用HE染色、油红O染色和免疫组织化学（IHC）染色检测小鼠主动脉的斑块面积/管腔面积（%）、脂质面积/斑块面积（%）和微血管密度（MVD）。此外，在离体和在体实验中进行了RT-PCR、ELISA和Western blot检测。结果：共鉴定出39个AS差异表达miRNAs，其中miR-126表达显著下调。双荧光素酶报告基因实验结果显示，miR-126与VEGF具有靶向关系，miR-126模拟物可抑制野生型VEGF报告基因载体的荧光素酶活性（p值<0.01）。在细胞实验中，细胞增殖实验和流式细胞术结果显示，CSEAE含药血清在24-72小时处理后显著增加增殖活性（p值<0.01）并降低HUVECs的凋亡水平（p值<0.01），RT-PCR结果显示CSEAE含药血清显著上调miR-126的表达（p值<0.01）并下调HUVECs中VEGF mRNA的表达（p值<0.01）。在动物实验中，HE染色和IHC染色显示CSEAE显著降低小鼠主动脉和斑块中的MVD（p值<0.01），并显著降低主动脉斑块面积/管腔面积（%）（p值<0.01）。此外，RT-PCR和Western blot结果显示，CSEAE显著上调小鼠主动脉中miR-126的表达（p值<0.01），下调VEGF mRNA的表达（p值<0.01），并降低VEGF（p值<0.01）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）（p值<0.01）和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT1）（p值<0.01）的蛋白表达水平，而ELISA显示CSEAE显著降低小鼠血清中血管内皮生长因子受体（VEGFR2）（p值<0.01）和缺氧诱导因子-1（HIF-1）（p值<0.01）的水平。结论：本研究强调CSEAE作为治疗AS的天然药物提取物，可提高HUVECs的迁移活力并减少其凋亡，以维持动脉内皮微环境的健康，同时CSEAE还能抑制ApoE−/−小鼠的血管生成并延缓斑块形成，提示CSEAE治疗AS的疗效可能与其抑制新生血管形成有关，其分子机制可能与miR-126/VEGF信号通路有关。