筛选S100A9作为关键因子
比较低转移和高转移ACC细胞及其外泌体中差异表达的分子。
通过mRNA微阵列和蛋白质组学分析SACC-83和SACC-LM细胞及其外泌体，鉴定差异表达蛋白，并通过Western blot验证S100A9高表达。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
外泌体S100A9通过激活癌症相关成纤维细胞促进腺样囊性癌的肺转移
Exosomal S100A9 promotes lung metastasis of adenoid cystic carcinoma via activating cancer-associated fibroblasts.
实验完整度
高包含体外细胞实验（共培养、功能实验）、动物模型（肺转移模型）、临床样本分析、单细胞转录组测序及蛋白质组学等多层次验证。
主要模型
SACC-83细胞系 SACC-LM细胞系 原代成纤维细胞（NFs和CAFs） NOD/SCID小鼠模型
重点核对
S100A9在SACC-LM细胞及其外泌体中高表达，且与肺转移相关。 外泌体S100A9促进成纤维细胞活化，上调FAP和α-SMA表达。 S100A9-exo通过IL-17-TNF-NF-κB轴激活成纤维细胞。 活化的成纤维细胞分泌IL-17促进SACC-83细胞EMT和肺转移。
摘要
腺样囊性癌（ACC）是一种起源于分泌腺的恶性上皮性肿瘤，常转移至肺部，是导致患者死亡的主要原因。在此，我们观察到钙结合蛋白S100A9在高转移性ACC细胞中显著上调，并显著富集于其衍生的外泌体中。采用单细胞RNA测序全面描绘肿瘤微环境（TME），揭示上皮细胞与癌症相关成纤维细胞（CAFs）之间存在强烈的细胞间通讯。机制上，富含S100A9的外泌体重编程正常成纤维细胞，使其获得活化CAF表型，其特征是FAP和α-SMA表达上调，以及IL-17、TNF-α和NF-κB信号通路富集。功能上，这些外泌体教育的CAFs通过IL-17依赖性信号轴促进ACC细胞的上皮-间质转化，并在体内促进肺转移。总之，这些发现确立了外泌体S100A9作为TME重编程的关键介质，提示靶向S100A9–IL-17轴可能成为阻断ACC肺转移的一种有前景的治疗策略。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 外泌体S100A9是否通过调节肿瘤微环境中的成纤维细胞促进腺样囊性癌的肺转移？
- 核心机制
- S100A9富集的外泌体重编程正常成纤维细胞为活化CAFs，通过IL-17-TNF-NF-κB轴促进成纤维细胞活化，活化CAFs分泌IL-17进而促进ACC细胞EMT和肺转移。
- 主要证据
- 体外实验证实S100A9-exo诱导NFs表达FAP/α-SMA并增强收缩和迁移能力；体内实验证实S100A9-exo预注射增加ACC肺转移；阻断IL-17逆转EMT表型。
- 研究意义
- 靶向S100A9–IL-17轴可能成为干扰ACC肺转移的一种有前景的治疗策略。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
临床样本和单细胞转录组分析
探究S100A9表达与临床特征及肿瘤微环境中细胞间通讯的关系。
对56例ACC组织进行免疫组化分析，对5例肿瘤和2例正常唾液腺进行单细胞测序，鉴定CAF亚群及与EMT上皮细胞间的通讯。
体外验证外泌体S100A9对成纤维细胞活化的影响
验证外泌体S100A9是否诱导成纤维细胞向CAF表型转化。
用SACC-LM来源的外泌体或S100A9过表达外泌体处理正常成纤维细胞，检测FAP/α-SMA表达、胶原收缩和迁移能力，并通过siRNA敲低或抑制剂处理验证特异性。
体内验证外泌体S100A9对肺转移的影响
评估外泌体S100A9是否促进肺转移和形成转移前微环境。
NOD/SCID小鼠经尾静脉注射外泌体（预转移微环境模型和转移模型），检测肺组织FAP/α-SMA表达、纤维连接蛋白等，并评估肺转移灶。
机制探究：IL-17-TNF-NF-κB轴
明确外泌体S100A9激活成纤维细胞的下游信号通路。
对处理后的成纤维细胞进行RNA测序，分析信号通路富集，并通过ELISA、Western blot、抑制剂实验验证IL-17和TNF-α的作用。
验证活化成纤维细胞通过IL-17促进肿瘤细胞EMT
测试活化成纤维细胞是否通过IL-17促进ACC细胞的恶性表型。
将活化的成纤维细胞与SACC-83细胞共培养，检测迁移、侵袭、增殖和EMT标记物变化，并利用IL-17中和抗体或重组IL-17A验证功能。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
验证免疫效应
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | RPMI-1640培养基 | Gibco | -- |
| DMEM/F12培养基 | Gibco | -- | |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 细胞转染 | Lipofectamine 2000转染试剂 | Invitrogen | -- |
| 外泌体分离 | 蔗糖垫 | -- | -- |
| 外泌体提取 | exoRNeasy血清/血浆Maxi试剂盒 | Qiagen | -- |
| 外泌体标记 | PKH26 | Sigma-Aldrich | -- |
| 免疫荧光 | DAPI | ZSGB-Bio | ZLI-9556 |
| Western blot | RIPA裂解液 | Beyotime | -- |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Thermo Scientific | -- | |
| ELISA | 人S100A9 ELISA试剂盒 | Elabscience | -- |
| 人IL-17A ELISA试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | H014-2 | |
| 中和实验 | IL-17A中和抗体 | R&D Systems | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养与外泌体处理 | 细胞系来源、培养条件、外泌体浓度及处理时间 阅读提示：Methods部分“Tissue samples and cell lines”和“Exosome isolation” |
| 成纤维细胞活化 | S100A9-exo处理时间、剂量、检测指标（FAP/α-SMA表达） 阅读提示：Figure 3图注及“Immunofluorescence”方法 |
| 小鼠肺转移模型 | 小鼠品系、周龄、外泌体剂量、注射途径、细胞量、时间点 阅读提示：Methods部分“Mouse model of lung metastasis” |
| 共培养实验 | 共培养时间、细胞数量比例、Transwell孔径 阅读提示：Figure 5图注及“Transwell assays”方法 |
| 分子机制验证 | 抑制剂浓度（BAY-117082）、抗IL-17中和抗体浓度、重组IL-17A浓度 阅读提示：Figure 4和Figure 5图注及“Western blot analysis”方法 |