利用UPLC-MS/MS方法阐明ABCB1介导的非小细胞肺癌细胞紫杉醇耐药的作用

目的：获得性紫杉醇耐药是非小细胞肺癌（NSCLC）有效化疗的关键障碍。本研究旨在阐明NSCLC中促进紫杉醇耐药的分子和药理学机制，并探索克服该耐药的潜在策略。方法：本文报道了一种整合的药理学和分析方法，用于量化紫杉醇在A549/TAX细胞模型（紫杉醇耐药A549细胞）中的分布并克服耐药。结果：Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验、集落形成和凋亡实验证实，与亲本A549细胞相比，A549/TAX细胞表现出显著的紫杉醇耐药性。基于RNA测序的转录组分析和Western blot验证，我们发现耐药细胞中ATP结合盒B亚家族成员1（ABCB1）（编码蛋白为P-糖蛋白）的表达显著上调。通过使用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS），我们证明ABCB1过表达促进细胞内紫杉醇的外排增加，从而降低其细胞毒性蓄积。ABCB1的基因沉默或使用特异性P-糖蛋白调节剂elacridar或tariquidar的药理学抑制，可恢复细胞内紫杉醇水平（通过UPLC-MS/MS测定），并在CCK-8实验中协同降低细胞活力。结论：这些发现揭示ABCB1介导的药物外排是NSCLC细胞紫杉醇耐药的关键机制，UPLC-MS/MS是检测紫杉醇浓度的灵敏分析方法。抑制ABCB1是使耐药肿瘤细胞对紫杉醇重新敏感的有前景的治疗策略。