建立CUMS抑郁大鼠模型
模拟慢性应激诱导的抑郁样行为
对除对照组外的大鼠进行28天慢性不可预知温和应激,包括多种应激源,每日随机2种。
Acupuncture improves depressive-like behaviors in CUMS rats by modulating lateral habenula synaptic plasticity via the BDNF/ERK/mTOR pathway.
研究包含CUMS大鼠模型、行为学测试、Western blot、ELISA、免疫荧光和Golgi染色等多个独立证据层级,并进行了功能和行为验证。
CUMS抑郁大鼠模型(Sprague-Dawley雄性大鼠) 体外行为学模型
CUMS建模:28天每日2种应激,应激方法3天内不重复 干预:针刺(风府GV16和上星GV23)隔日一次,电针0.5 mA、2 Hz,氟西汀2.1 mg/kg灌胃 行为学测试:OFT、EPM、FST、SPT 分子检测:Western blot、ELISA、免疫荧光、Golgi染色
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟慢性应激诱导的抑郁样行为
对除对照组外的大鼠进行28天慢性不可预知温和应激,包括多种应激源,每日随机2种。
比较针刺、电针、氟西汀对CUMS大鼠的影响
大鼠分为6组:CON、CUMS、FLX、AP、Sham-AP、EA。干预每日一次,持续4周。
评估抑郁样行为(快感缺失、绝望行为、焦虑等)
进行体重测量、OFT、EPM、FST、SPT测试。
检测外侧缰核中BDNF/ERK/mTOR通路、突触相关蛋白表达及树突棘形态
取脑组织进行Western blot、ELISA、免疫荧光和Golgi染色。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | 氟西汀 | Sigma-Aldrich | PHR1394-1G |
| 针刺 | 不锈钢针 | HanYi | -- |
| 电针 | 电针仪 | Huatuo | SDZ-II |
| Western blot | RIPA裂解液 | Solarbio | R0010 |
| 蛋白酶抑制剂 | Roche | 04693132001 | |
| 磷酸酶抑制剂 | Roche | 04906837001 | |
| BCA蛋白检测试剂盒 | Thermo Scientific | QB214754 | |
| PVDF膜 | Amersham | K5NA8023B | |
| 抗BDNF抗体 | Proteintech | 28205-1-AP | |
| 抗TrkB抗体 | Proteintech | 13129-1-AP | |
| 抗ERK1/2抗体 | Proteintech | 11257-1-AP | |
| 抗p-ERK1/2抗体 | Proteintech | 28733-1-AP | |
| 抗mTOR抗体 | Proteintech | 66888-1-Ig | |
| 抗p-mTOR抗体 | CST | 2974 | |
| 抗p70S6K抗体 | Proteintech | 66-638-Ig | |
| 抗p-p70S6K抗体 | Affinity | AF3228 | |
| 抗4E-BP1抗体 | Proteintech | 60246-1-Ig | |
| 抗SYP抗体 | Proteintech | 67864-1-Ig | |
| 抗PSD-95抗体 | Proteintech | 20665-1-AP | |
| 二抗 | Proteintech | SA00001-1/SA00001-2 | |
| ELISA | 5-HT ELISA试剂盒 | Jianglai Biology | JL53170-48 T |
| DA ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-0046c | |
| NE ELISA试剂盒 | -- | -- | |
| 酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 免疫荧光 | 牛血清白蛋白 | Servicebio | GC305010 |
| 抗BDNF抗体 | Servicebio | GB11559 | |
| 抗TrkB抗体 | Servicebio | GB11295-2 | |
| 抗SYP抗体 | Servicebio | GB15553 | |
| 抗PSD95抗体 | Servicebio | GB12277 | |
| DAPI染色液 | Servicebio | G1012 | |
| 荧光显微镜 | NIKON | ECLIPSE C1 | |
| Golgi染色 | 固定液 | Servicebio | G1101 |
| 高尔基染色液 | Servicebio | G1069 | |
| 光学显微镜 | Nikon | Eclipse Ci-L | |
| 数据分析 | GraphPad Prism | GraphPad Software | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | SD雄性大鼠,100-120g,3-4周龄,SPF级;CUMS应激28天,每日2种,3天内不重复 阅读提示:Materials and methods: Animals and groups, CUMS model procedure |
| 干预措施 | 针刺风府(GV16)和上星(GV23),隔日一次,留针20分钟;电针0.5 mA,2 Hz,20分钟;氟西汀2.1 mg/kg灌胃,每日一次,持续4周 阅读提示:Materials and methods: Interventions |
| 行为学测试 | OFT、EPM、FST、SPT的具体参数和测试时间 阅读提示:Materials and methods: Behavioral tests |
| 分子检测 | Western blot抗体浓度、ELISA试剂盒、免疫荧光抗体浓度、Golgi染色固定时间等 阅读提示:Materials and methods: Western blotting, ELISA, Immunofluorescence, Golgi staining |