高尿酸血症小鼠模型的比较
比较不同诱导方法对血尿酸水平、肝肾功能的影响,确定合适的模型。
将C57BL/6JNifdc小鼠分为7组,分别给予不同诱导剂组合(肌苷/鸟苷/OXO、次黄嘌呤/OXO、腺嘌呤/OXO等),持续34天,定期检测血尿酸、肌酐、尿素,并收集肾、肝组织进行组织学检查。
Comparative analysis of hyperuricemia induction methods and probiotic interventions in mice.
包含体内动物模型比较(5种HUA诱导方法)、体外益生菌功能筛选、益生菌干预HUA小鼠模型,并进行了机制验证(基因表达、酶活性、SCFAs及炎症因子检测)。
C57BL/6JNifdc小鼠高尿酸血症模型 HPD模型(次黄嘌呤300mg/kg/d+OXO 300mg/kg/d灌胃) 七株益生菌菌株(L. fermentum JNL0031等)
HPD模型:次黄嘌呤300mg/kg/d+OXO 300mg/kg/d灌胃,连续15天 益生菌剂量:2×109 CFU/天,灌胃 阳性对照:别嘌呤醇5mg/kg/d灌胃 肾损伤评估:血清肌酐、尿素、肾指数、GFR及H&E染色 机制检测:肾脏URAT1、GLUT9 mRNA表达,肝脏XOD/PNP活性及mRNA
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
比较不同诱导方法对血尿酸水平、肝肾功能的影响,确定合适的模型。
将C57BL/6JNifdc小鼠分为7组,分别给予不同诱导剂组合(肌苷/鸟苷/OXO、次黄嘌呤/OXO、腺嘌呤/OXO等),持续34天,定期检测血尿酸、肌酐、尿素,并收集肾、肝组织进行组织学检查。
从发酵乳制品中分离并鉴定具有潜在降尿酸作用的益生菌。
从内蒙古、青海、新疆的发酵乳制品中分离菌株,通过形态和16S rRNA基因测序(27F/1492R)进行鉴定,构建系统发育树。
评估益生菌降解尿酸和鸟苷的能力。
将益生菌与尿酸溶液或鸟苷溶液共孵育,测定尿酸降解率和鸟苷转化/去除率。
验证益生菌在体内对血尿酸水平及肾功能的影响。
建立HPD模型,同时给予不同益生菌或别嘌呤醇,持续15天,检测血尿酸、肌酐、尿素及粪便/尿液尿酸。
探究益生菌调节尿酸代谢的分子机制。
检测肝脏XOD/PNP活性及mRNA表达,肾脏URAT1/GLUT9 mRNA表达,炎症因子IL-6/NF-κB/TNF-α mRNA水平。
评估益生菌对肠道短链脂肪酸的影响及其与尿酸代谢的关联。
通过GC-MS检测结肠内容物中SCFAs水平(乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸),并进行相关性分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 体外尿酸降解实验 | 尿酸比色测定试剂盒 | Elabscience | E-BC-K016-M |
| 生化分析 | 肌酐比色测定试剂盒 | Elabscience | E-BC-K188-M |
| 尿素比色测定试剂盒 | Elabscience | E-BC-K183-M | |
| 丙氨酸氨基转移酶活性测定试剂盒 | Elabscience | E-BC-K235-M | |
| 天冬氨酸氨基转移酶活性测定试剂盒 | Elabscience | E-BC-K236-M | |
| 黄嘌呤氧化酶活性测定试剂盒 | Elabscience | E-BC-K805-M | |
| 碱性磷酸酶测定试剂盒 | Beyotime | P0321S | |
| 动物实验 | MediBeacon经皮肾小球滤过率监测仪 | MediBeacon | -- |
| RNA提取 | RNAiso Plus | TaKaRa | 9109 |
| RT-qPCR | TB Green® PrimeScript™一步法RT-PCR试剂盒II | TaKaRa | RR086A |
| LightCycler 480II实时荧光定量PCR检测系统 | Roche | -- | |
| 体外鸟苷降解实验 | Agilent 1260 Infinity II高效液相色谱系统 | Agilent | -- |
| Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱 | Agilent | -- | |
| 统计学分析 | GraphPad Prism 7.00 | GraphPad Software | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 高尿酸血症模型构建 | 小鼠品系、性别、年龄、体重;各组诱导剂及剂量(如次黄嘌呤300mg/kg/d+OXO 300mg/kg/d);给药方式(灌胃/腹腔注射);实验周期(15或34天) 阅读提示:Materials and methods 2.4 (1) 和 (2) 中关于模型构建的描述 |
| 益生菌处理 | 菌株名称和编号;剂量(2×10^9 CFU/天);给药方式(灌胃);给药时间(与建模同时开始,持续15天) 阅读提示:Materials and methods 2.4 (2) 中的益生菌处理方法 |
| 生化指标检测 | 血清尿酸、肌酐、尿素、ALT、AST的检测方法及试剂盒货号;肝脏XOD/PNP活性检测方法 阅读提示:Materials and methods 2.5 生化分析部分 |
| 基因表达分析 | RT-qPCR使用的试剂盒、设备、引物序列(Supplementary Table S1)、内参基因(β-actin)、相对定量方法(2-ΔΔCt) 阅读提示:Materials and methods 2.8 定量实时PCR分析部分 |
| 组织学分析 | 组织固定液(4%多聚甲醛)、切片制备、染色方法(H&E) 阅读提示:Materials and methods 2.6 组织学分析部分 |