ALKBH5通过调节ITGB1去甲基化并影响巨噬细胞极化缓解下肢动脉硬化

目的：M6A甲基化调控的巨噬细胞在动脉硬化的发生和发展中发挥重要作用。然而，它们在下肢动脉硬化中的作用仍不清楚。因此，本研究旨在探讨调节下肢动脉硬化甲基化的关键因素及其通过影响巨噬细胞极化影响动脉硬化的机制。方法：使用Dot blot方法检测下肢动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的m6A甲基化水平。此外，使用ELISA和Western blotting检测RNA甲基转移酶和去甲基化酶的表达水平。使用LPS（100 ng/mL）刺激RAW264.7细胞建立炎症巨噬细胞模型，并使用Western blotting评估ALKBH5和ITGB1的表达。进行免疫荧光染色以评估肾组织中M1巨噬细胞标志物（F4/80+CD86）和M2巨噬细胞标志物（F4/80+CD206）的表达。使用ELISA测量小鼠中细胞因子（IL-6、IL-1β、TNF-a、IL-10和TGF-β）和血浆脂质水平。通过球囊牵拉手术和高脂喂养在ApoE−/−小鼠中建立动脉粥样硬化模型。分别使用油红O染色和苏木精-伊红（HE）染色测量小鼠股动脉中动脉粥样硬化斑块面积和坏死核心大小。此外，使用Starbase2.0进行ALKBH5的下游靶基因预测。使用RT-qPCR评估ITGB1的半衰期。结果：下肢动脉粥样硬化患者PBMCs中的m6A甲基化水平显著升高。其中，RNA去甲基化酶ALKBH5在下肢动脉粥样硬化患者PBMCs中的表达最低。进一步分析显示，ALKBH5可以缓解下肢动脉粥样硬化的进展并促进M2巨噬细胞极化。ALKBH5可以通过去甲基化降低ITGB1的稳定性。机制上，ALKBH5通过影响ITGB1的去甲基化来影响巨噬细胞极化并减轻下肢动脉粥样硬化。结论：ALKBH5通过调节ITGB1的去甲基化促进M2巨噬细胞极化并缓解下肢动脉粥样硬化。对这一过程的深入理解不仅有助于阐明动脉粥样硬化的分子机制，也为开发新的治疗策略提供了可能性。