自噬蛋白RUBCNL/PACER抑制RIPK1激酶依赖的细胞凋亡和坏死性凋亡

间充质干细胞（MSCs）用于细胞治疗；然而，其应用受到移植后在促炎微环境中存活率差的限制。MSCs中的巨自噬/自噬激活构成一种应激适应途径，促进细胞稳态。我们的蛋白质组学数据表明，RUBCNL/PACER（RUN和富含半胱氨酸结构域含有beclin 1相互作用蛋白样），一种自噬的正调控因子，也参与细胞死亡。因此，我们筛选了在RUBCNL功能缺失或获得的情况下，MSCs对各种细胞死亡刺激的存活情况。当RUBCNL表达时，MSCs免受TNF（肿瘤坏死因子）诱导的调节性细胞死亡的影响。TNF通过诱导RIPK1激酶依赖的细胞凋亡或坏死性凋亡来促进炎症。我们确定，MSCs在感应TNF时死于RIPK1激酶依赖的细胞凋亡，当半胱天冬酶失活时则死于坏死性凋亡。我们表明RUBCNL是RIPK1依赖的细胞凋亡和坏死性凋亡的负调控因子。此外，失去调节自噬能力的RUBCNL突变体保留了其负调控细胞死亡的功能。我们还发现RUBCNL与RIPK1形成复合物，该复合物在响应TNF时解体。与此发现一致，RUBCNL表达限制了RIPK1-TNFRSF1A/TNFR1复合物I的组装，表明RUBCNL和RIPK1之间的复合物形成抑制了TNF信号传导。这些结果为RIPK1介导的细胞死亡与自噬机制之间的串扰提供了新的见解，并提示RUBCNL由于其自噬和凋亡/坏死性凋亡的功能双重性，可作为提高MSCs治疗效果的靶点。缩写：BAF：巴弗洛霉素A1；CASP3：半胱天冬酶3；Caspases：半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶；cCASP3：切割的CASP3；CQ：氯喹；CHX：放线菌酮；cPARP：切割的聚（ADP-核糖）聚合酶；DEPs：差异表达蛋白；ETO：依托泊苷；MEF：小鼠胚胎成纤维细胞；MLKL：混合谱系激酶结构域样；MSC：间充质干细胞；MTORC1：雷帕霉素靶蛋白激酶复合物1；Nec1s：坏死他汀1s；NFKB/NF-kB：B细胞中κ轻多肽基因增强子的核因子；PLA：邻位连接技术；RCD：调节性细胞死亡；RIPK1：受体（TNFRSF）相互作用的丝氨酸-苏氨酸激酶1；RIPK3：受体相互作用的丝氨酸-苏氨酸激酶3；RUBCNL/PACER：RUN和富含半胱氨酸结构域含有beclin 1相互作用蛋白样；siCtrl：小干扰RNA无义序列；siRNA：小干扰RNA；TdT：末端脱氧核苷酸转移酶；Tm：衣霉素；TNF：肿瘤坏死因子；TNFRSF1A/TNFR1：肿瘤坏死因子受体超家族成员1a