建立胆汁性肝硬化大鼠模型
模拟肝硬化及门脉高压的病理状态
对Sprague-Dawley大鼠进行胆总管结扎(BDL)诱导次级胆汁性肝硬化,假手术作为对照。
Ezetimibe treatment reduces oxidized low-density lipoprotein in biliary cirrhotic rats.
包含BDL诱导的肝硬化大鼠模型、假手术对照、药物处理组,并检测血流动力学、生化、氧化应激、ox-LDL、组织学及蛋白表达等多层级指标。
Sprague-Dawley大鼠胆总管结扎(BDL)诱导的胆汁性肝硬化伴门脉高压模型 假手术对照组大鼠
依折麦布剂量10 mg/kg/d 口服灌胃4周 BDL诱导胆汁性肝硬化,假手术作为对照 血浆ox-LDL水平检测 肝内ox-LDL免疫组化染色 肝组织LOX-1蛋白表达Western blot检测
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟肝硬化及门脉高压的病理状态
对Sprague-Dawley大鼠进行胆总管结扎(BDL)诱导次级胆汁性肝硬化,假手术作为对照。
评估依折麦布对肝硬化大鼠的影响
随机分为三组:假手术+溶剂(SV)、BDL+溶剂(BV)、BDL+依折麦布(BE),口服灌胃4周。
检测肝硬化及依折麦布对全身和门脉血流动力学及肝功能的影响
测量平均动脉压、心率、门脉压、心输出量、门静脉血流、肠系膜上动脉血流等,并检测血浆TNF-α、肌酐、总胆固醇、甘油三酯、HDL、LDL、ox-LDL、ALT、AST、总胆红素。
评估肝纤维化、脂肪积累和ox-LDL沉积
肝组织进行H&E、天狼星红、油红O染色及ox-LDL免疫组化染色。
评估依折麦布对全身氧化应激的影响
通过检测血清TBARS活性来评估脂质过氧化。
探索依折麦布降低ox-LDL的机制
采用Western blot分析肝脏中IκBα、COX-1、COX-2、LOX-1、NPC1L1和β-actin蛋白表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物麻醉 | Zoletil | -- | -- |
| 组织化学染色 | 天狼星红试剂盒 | Polysciences Inc. | -- |
| 油红O试剂盒 | Polysciences Inc. | -- | |
| 免疫组化 | 抗ox-LDL抗体 | MyBioSource | MBS620958 |
| EnVision检测系统 | Dako | K5007 | |
| ELISA | 大鼠TNF-α试剂盒 | R&D Systems | -- |
| 大鼠ox-LDL ELISA试剂盒 | Elabscience | -- | |
| Western blot | 抗IkBα抗体 | Cell Signaling | 4814S |
| 抗COX-1抗体 | Cell Signaling | 4841S | |
| 抗COX-2抗体 | Cell Signaling | 12282S | |
| 抗LOX-1抗体 | GeneTex | GTX59636 | |
| 抗NPC1L1抗体 | GeneTex | GTX30599 | |
| 抗β-actin抗体 | GeneTex | GTX629630 | |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG抗体 | Sigma Chemical Co. | -- | |
| Immobilon Western化学发光HRP底物 | Merck Millipore | -- | |
| BioSpectrum 600成像系统 | Ultra-Violet Products Ltd. | -- | |
| 药物处理 | 依折麦布 | MSD International GmbH | -- |
| 血流动力学测量 | Spectramed DTX传感器 | Spectramed Inc. | -- |
| 多通道记录仪(型号RS 3400) | Gould Inc. | -- | |
| 血流测量 | 血管周围超声传输时间流量探头(直径1毫米) | Transonic Systems | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型制备 | 大鼠品系、性别、体重;BDL手术方法;术后时长 阅读提示:见Methods 2.1 Animal model for biliary cirrhosis with portal hypertension |
| 药物干预 | 依折麦布剂量、给药途径、给药频率、疗程;对照组处理 阅读提示:见Methods 2.2 Study protocol |
| 血流动力学检测 | 麻醉方式、导管植入位置、记录设备、心输出量测量方法 阅读提示:见Methods 2.3 Measurement of systemic and portal hemodynamics |
| 组织学检测 | 固定、包埋、切片厚度;染色试剂盒来源;抗体稀释比例 阅读提示:见Methods 2.5 和2.6 |
| 氧化应激与炎症因子检测 | TBARS检测方法、ELISA试剂盒类型、样本处理条件 阅读提示:见Methods 2.7和2.8 |
| 蛋白表达分析 | 抗体品牌、稀释比例、内参选择;显影底物、成像系统 阅读提示:见Methods 2.10 Western blot analysis |