建立神经病理性疼痛模型
模拟周围神经压迫性损伤,诱导稳定的机械性痛觉异常和神经炎症
对大鼠坐骨神经施加可控力(6g 张力)进行慢性压迫性损伤(CCI),左侧坐骨神经暴露后,在距三叉上方 1 cm 处以 5-0 尼龙线结扎 4 条,间距约 1 mm。
Ultrahigh frequency transcutaneous electrical nerve stimulation for neuropathic pain alleviation and neuromodulation.
包含行为学、免疫荧光、RNA测序等多层级验证,明确分组和统计,机制探讨有所依据。
Sprague-Dawley 雄性大鼠慢性压迫性损伤模型 大鼠坐骨神经 背根神经节(DRG)神经元
CCI 模型:4 条 5-0 尼龙结扎线,间距约 1 mm,位于坐骨神经三叉上方 1 cm UHF-TENS 参数:500 kHz 正弦波,2 Hz 重复频率,25 ms 脉冲宽度,每次治疗 15 分钟 行为学测试时间点:治疗前、治疗后 30 分钟、第 1 天至第 4 天 DRG 组织采集时间点:神经暴露手术、术后第 7 天、UHF 治疗后第 1 和第 5 天 样本量:行为学每组 6 只(损伤组),DRG 免疫荧光和 RNA 测序每组 4 只
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟周围神经压迫性损伤,诱导稳定的机械性痛觉异常和神经炎症
对大鼠坐骨神经施加可控力(6g 张力)进行慢性压迫性损伤(CCI),左侧坐骨神经暴露后,在距三叉上方 1 cm 处以 5-0 尼龙线结扎 4 条,间距约 1 mm。
验证 UHF-TENS 对神经病理性疼痛的治疗效果和安全性
将 UHF-TENS 设备置于手术部位皮肤上,给予 500 kHz 正弦波刺激,每次 15 分钟,共给予两轮治疗。
评估 UHF-TENS 对机械性痛觉异常的影响
使用 von Frey 细丝测量后爪缩爪阈值,比较治疗组和对照组在不同时间点的阈值变化。
观察 UHF-TENS 对背根神经节中疼痛相关神经肽和信号蛋白表达的影响
在治疗后第 1 天和第 5 天收集 L4-L5 DRG,进行免疫荧光染色,定量分析 BDNF、COX2、c-Myc、SP、MEK 和 c-Fos 的阳性神经元比例。
揭示 UHF-TENS 对背根神经节中神经炎症相关基因表达的影响
提取 L4-L5 DRG 的总 RNA,使用 NanoString nCounter Neuroinflammation Panel 检测 757 个基因的表达,通过差异表达分析和通路分析筛选 UHF-TENS 调控的基因。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| UHF-TENS 治疗 | StimOn™ 疼痛缓解系统 (GM2439) | Gimer Medical Co., Ltd. | -- |
| 动物手术 | 异氟烷 | Sigma-Aldrich | -- |
| 5-0 尼龙缝线 | Ethicon | -- | |
| 行为学测试 | Semmes-Weinstein 单丝 | North Coast Medical, Inc. | -- |
| 免疫荧光染色 | Triton X-100 | -- | -- |
| 牛血清白蛋白 | -- | -- | |
| 抗 NF200 抗体 | Sigma-Aldrich | N0142 | |
| 抗 MBP 抗体 | GeneTex | GTX133108 | |
| 抗 c-FOS 抗体 | GeneTex | GTX129846 | |
| 抗 BDNF 抗体 | Elabscience | E-AB-63470 | |
| 抗 COX2 抗体 | Elabscience | E-AB 62884 | |
| 抗 c-Myc 抗体 | GeneTex | GTX17356 | |
| 抗 P 物质抗体 | GeneTex | GTX10353 | |
| 抗 MEK1 抗体 | GeneTex | GTX134234 | |
| 山羊抗小鼠 IgG 抗体 | GeneTex | GTX213111-05 | |
| 山羊抗豚鼠 IgG 抗体 | GeneTex | GTX26965 | |
| 山羊抗兔 IgG 抗体 | GeneTex | GTX213110-04 | |
| DAPI | -- | -- | |
| 含 DAPI 的封片剂 | Abcam | ab104139 | |
| 荧光显微镜 (BX61) | Olympus | -- | |
| ImageJ 软件 | -- | -- | |
| RNA 提取与测序 | TRIzol 试剂 | Sigma-Aldrich | -- |
| nCounter® 小鼠神经炎症 v1.0 面板 | NanoString Technologies | -- | |
| QuickDrop SpectraMax 分光光度计 | Molecular Devices | -- | |
| 生物分析仪 (型号2100) | Agilent Technologies | -- | |
| 统计分析 | Prism (9.5.1版) | GraphPad Software | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 大鼠品系、体重、结扎线型号与数量、结扎位置和间距、结扎力度(6g 张力) 阅读提示:Materials and Methods: Animals and surgical procedures |
| UHF-TENS 干预 | 刺激参数(频率、波形、脉冲宽度)、治疗时长、电极放置方式、治疗次数及间隔 阅读提示:Materials and Methods: UHF-TENS for the injured sciatic nerve, Figure 1B |
| 行为学评估 | 测试时间点、von Frey 纤维丝规格、起始力、刺激时间、测试间隔、样本量 阅读提示:Materials and Methods: Sensory assessment, Figure 1C |
| 免疫荧光检测 | 组织固定、切片厚度、抗体稀释比、孵育时间、阳性定量标准 阅读提示:Materials and Methods: Immunofluorescent staining (IF) |
| 转录组分析 | RNA 提取方法、NanoString 面板、RNA 质量指标、归一化方法、差异表达分析参数 阅读提示:Materials and Methods: Nanostring analysis for RNA sequencing |