PD-L1在尖锐湿疣中的表达及其意义

The expression and significance of PD-L1 in condyloma acuminatum.

作者信息Yamei Liu, Weiqi Huang, Kun Yang, Xiangxi Du, Xueyun Guo, Yuchun Cao
PMID38186053
发布时间2024-01
DOI10.1111/srt.13558

实验完整度

中

包含临床组织样本检测(免疫组化、qPCR、Western blot、免疫荧光)和体外细胞模型(HPV11-E7 HaCaT与Jurkat共培养)两个证据层级,但缺乏体内动物模型。

主要模型

尖锐湿疣患者疣体组织 健康人包皮组织 HaCaT细胞(HPV11-E7稳定转染) Jurkat细胞

重点核对

临床样本:20例尖锐湿疣疣体组织与20例健康包皮组织 HPV11-E7慢病毒转染HaCaT细胞(MOI=10) 共培养条件:2.5×10^5 HaCaT细胞与5×10^5 Jurkat细胞共培养24小时 PD-L1阻断:抗PD-L1抗体(329716, BioLegend)处理4小时 检测指标:PD-L1表达、Jurkat细胞凋亡、增殖和细胞周期

摘要

背景:已有报道称,程序性死亡配体1(PD‐L1)在病毒感染期间细胞中高表达,这有助于病毒逃避宿主免疫。然而,人乳头瘤病毒(HPV)与尖锐湿疣中PD‐L1的关系以及它们是否参与免疫抑制尚未见报道。本文旨在探讨PD‐L1在尖锐湿疣中的表达及其意义。方法:评估了尖锐湿疣患者疣体组织和健康人包皮组织中PD‐L1的表达。采用慢病毒转染将HPV11‐E7基因导入HaCaT细胞,以研究HPV感染是否影响PD‐L1的表达。将成功构建的HPV11‐E7 HaCaT细胞与Jurkat细胞共培养,通过流式细胞术和细胞计数试剂盒‐8(CCK‐8)法评估Jurkat细胞的凋亡、增殖以及细胞周期。结果:PD‐L1在生殖器疣的角质形成细胞中高表达。通过构建细胞模型,我们发现HPV11‐E7可上调HaCaT细胞中PD‐L1的表达。此外,HPV11‐E7 HaCaT细胞可通过PD‐1/PD‐L1信号通路促进Jurkat细胞凋亡,抑制Jurkat细胞增殖,并介导Jurkat细胞周期阻滞。结论:HPV感染可能上调生殖器疣角质形成细胞中PD‐L1的表达,并参与抑制局部T细胞功能。关键词:尖锐湿疣,角质形成细胞,程序性死亡配体1,T细胞。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
HPV感染是否通过上调角质形成细胞PD-L1表达参与尖锐湿疣局部免疫抑制?
核心机制
HPV11-E7通过上调角质形成细胞PD-L1表达,激活PD-1/PD-L1信号通路,促进T细胞凋亡、抑制增殖并诱导细胞周期阻滞。
主要证据
临床样本显示PD-L1在疣体角质形成细胞高表达;HPV11-E7 HaCaT细胞上调PD-L1,共培养后Jurkat细胞凋亡增加、增殖下降,抗PD-L1抗体可逆转。
研究意义
研究提示干扰PD-1/PD-L1信号可能改善尖锐湿疣局部T细胞功能,为治疗提供新策略。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

临床样本PD-L1表达检测

评估PD-L1在尖锐湿疣疣体与正常包皮中的表达差异。

收集尖锐湿疣患者疣体组织和健康人包皮组织,进行免疫组化染色、qRT-PCR、Western blot和双色免疫荧光检测PD-L1表达及定位。

2

构建HPV11-E7 HaCaT细胞模型

验证HPV11-E7是否能上调HaCaT细胞中PD-L1的表达。

使用携带HPV11-E7基因的慢病毒转染HaCaT细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,Western blot和RT-qPCR验证PD-L1表达。

3

共培养实验检测T细胞功能

探究HPV感染角质形成细胞是否通过PD-1/PD-L1通路影响Jurkat细胞凋亡、增殖和细胞周期。

将HPV11-E7 HaCaT细胞与PHA活化的Jurkat细胞共培养,使用抗PD-L1抗体阻断,流式细胞术检测凋亡和周期,CCK-8检测增殖。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
DMEM培养基GibcoC11995500BT
胎牛血清Gibco10091148
RPMI 1640培养基GibcoC11875500BT
PD-L1抗体Proteintech66248-1-Ig
K10抗体ElabscienceE-AB-31137
逆转录试剂盒Yeasen11123ES
RT-qPCR试剂盒Yeasen11195ES
RIPA裂解液----
抗β-肌动蛋白抗体ABclonalAC026
抗DDDDK标签抗体ABclonalAC005
嘌呤霉素----
凋亡检测试剂盒BD Pharmingen556547
细胞周期检测试剂盒KeyGen BiotechKGA511
抗PD-L1抗体BioLegend329716
植物血凝素----
Accuri C6流式细胞仪BD--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
临床样本收集
样本量和来源:20例尖锐湿疣患者疣体组织与20例健康人包皮组织;患者需符合HPV6/11阳性、病程≥3个月、年龄18-60岁等标准。
阅读提示:Methods 2.2 Study subjects
PD-L1表达检测
抗体:抗PD-L1(66248-1-Ig, Proteintech),抗K10(E-AB-31137, Elabscience);免疫组化/荧光染色步骤(如抗原修复、抗体孵育时间)。
阅读提示:Methods 2.4 Immunohistochemical staining, 2.5 Immunofluorescence
细胞模型构建
慢病毒MOI=10,嘌呤霉素筛选浓度1 μg/mL,筛选时间1周;验证方法Western blot和RT-qPCR。
阅读提示:Methods 2.8 Building the cell model
共培养实验
Jurkat细胞活化(PHA 5 μg/mL, 48h);共培养比例(凋亡/周期:2.5×10^5 HaCaT + 5×10^5 Jurkat;增殖:5×10^3 HaCaT + 1×10^4 Jurkat);共培养时间(24h,增殖检测1,2,3天);抗PD-L1抗体(329716, BioLegend)预处理4小时。
阅读提示:Methods 2.9, 2.10, Results 3.3, 3.4