Notch信号在血小板中以非经典旁分泌方式增强血栓形成能力

背景：Notch信号在包括巨核细胞在内的哺乳动物细胞中决定细胞命运。无核血小板中是否存在功能性Notch信号仍不清楚。方法：通过RT-qPCR、Western分析和流式细胞术检测了人血液中分离的血小板中的Notch1和Delta样配体（DLL）-4的转录本/肽段。通过发光聚集法和流式细胞术分析了血小板聚集、颗粒分泌和血小板-白细胞相互作用。利用纳米颗粒追踪分析仪记录了血小板来源的细胞外囊泡。使用微流控平台定量了固定化胶原上的血小板血栓。通过荧光分光光度法监测了细胞内钙。通过血栓弹力图研究了全血凝血。通过活体显微镜对氯化铁诱导的小鼠肠系膜小动脉血栓进行了成像。结果：我们证明了人血小板中Notch1、其配体DLL-4及其各自转录本的表达。凝血酶上调了Notch1和DLL-4的合成及表面转位。DLL-4反过来通过切割Notch受体并释放其胞内域（NICD）来激发邻近血小板转变为“活化”表型，而这可通过抑制γ-分泌酶和磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）来阻止。抑制Notch信号也限制了激动剂诱导的血小板活化，并显著损害了小鼠的动脉血栓形成。引人注目的是，通过阻断抗体阻止DLL-4-Notch1相互作用消除了凝血酶诱导的血小板聚集和细胞外囊泡脱落。结论：我们的研究提供了令人信服的证据，支持血小板聚集体内非经典旁分泌Notch信号与生理激动剂协同作用产生闭塞性壁内血栓。因此，Notch通路可能成为潜在的抗血小板/抗血栓治疗靶点。