Wilms瘤1相关蛋白通过介导Twist1的N6-甲基腺苷修饰对非小细胞肺癌铁死亡和免疫逃逸的影响

目的：非小细胞肺癌（NSCLC）是全球最常见和最具侵袭性的癌症之一，但其复杂的分子机制仍未完全阐明。本研究探讨了Wilms瘤1相关蛋白（WTAP）通过Twist家族BHLH转录因子1（Twist1）的N6-甲基腺苷（m6A）修饰对NSCLC细胞铁死亡和免疫逃逸的影响。材料与方法：采用Western blot和逆转录定量聚合酶链反应检测NSCLC细胞系中Twist1的表达及其环状结构。将靶向Twist1和WTAP的小干扰RNA转染至H2170细胞，并通过细胞计数试剂盒-8、流式细胞术、末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记、ROS染色和酶联免疫吸附试验评估其对细胞活力、凋亡、铁死亡标志物（活性氧[ROS]、丙二醛[MDA]和Fe2+）及免疫逃逸的影响。采用与CD8+ T细胞共培养评估细胞毒性和耗竭标志物表达（淋巴细胞活化基因-3、程序性细胞死亡蛋白1和含Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体）。Magna甲基化RNA免疫沉淀、光激活核糖核苷增强交联和免疫沉淀以及使用甲基化抑制剂3-脱氮腺苷A（3-DAA）处理证实了Twist1的m6A修饰及WTAP的调控作用。结果：Twist1在NSCLC细胞系中显著升高（P < 0.05）。敲低Twist1抑制NSCLC细胞活力；促进凋亡；增加ROS、MDA和Fe2+水平；增强CD8+ T细胞的细胞毒性；并降低耗竭标志物的表达（P < 0.05）。这些效应被铁死亡抑制剂Fer-1部分逆转。WTAP在NSCLC细胞中表达升高，其敲低显著降低了Twist1的m6A修饰和表达（P < 0.05）。此外，Twist1过表达部分逆转了WTAP敲低对NSCLC细胞增殖、铁死亡和免疫逃逸的抑制作用（P < 0.05）。结论：Twist1在NSCLC中高表达。它通过增强铁死亡和免疫逃逸促进NSCLC进展。WTAP介导的m6A甲基化在调节Twist1表达中起关键作用。WTAP/Twist1轴可能作为NSCLC的潜在治疗靶点。