ENTR1通过调节糖酵解影响能量代谢从而促进结肠癌的进展

ENTR1 affects the progression of colon cancer by regulating energy metabolism under the influence of glycolysis.

作者信息Anquan Ma, Chuanyao Zhai, Qixuan He, Wenhao Wang, Huiping Ren, Kai Mao, Weipeng Lan, Jing Lan
PMID40462015
发布时间2025-06-03
DOI10.1186/s12885-025-14412-5

实验完整度

包含体外细胞实验(HCT116)验证增殖、迁移、糖酵解相关酶表达,并结合多组学生物信息学分析(SMR、WGCNA等),但缺乏体内实验验证。

主要模型

HCT-116结肠癌细胞系 TCGA泛癌数据集 eQTLGen与FinnGen数据库(用于SMR分析)

重点核对

HCT-116细胞系(STR鉴定) siRNA敲低ENTR1(GeneRal Biol合成) CCK-8增殖检测(0h, 24h, 48h, 72h) 糖酵解酶GLUT1, LDHA, PKM2的表达水平

摘要

背景:内体相关转运调节因子1(ENTR1),也称为血清学定义的结肠癌抗原3(SDCCAG3),最初在结肠癌中发现,并在蛋白质转运中发挥关键作用。初步研究表明ENTR1参与某些肿瘤类型的生长。方法:在本研究中,我们使用多个数据库的临床样本数据分析了ENTR1在正常和肿瘤组织中的表达水平。我们还对ENTR1进行了孟德尔随机化(MR)分析。最后,我们进行了体外实验以验证ENTR1对结肠癌增殖和糖酵解的影响。结果:我们的研究结果显示ENTR1在大多数肿瘤中表达上调。基于汇总数据的孟德尔随机化(SMR)分析表明ENTR1与结肠癌之间存在因果关系。进一步的机器学习和基于代谢物的孟德尔随机化提示ENTR1可能通过调节糖酵解影响肿瘤生长。进一步的细胞实验证实,敲除ENTR1会降低HCT-116细胞的增殖,并下调关键糖酵解酶的表达水平。结论:本研究揭示了ENTR1在多种癌症中的作用,并证明ENTR1可能通过调节糖酵解促进结肠癌生长,为癌症治疗提供了新的靶点。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
ENTR1是否通过调节糖酵解影响结肠癌的进展?
核心机制
ENTR1通过上调关键糖酵解酶(GLUT1, LDHA, PKM2)的表达,促进糖酵解,从而促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。
主要证据
在HCT-116细胞中敲低ENTR1后,CCK-8和活/死染色显示增殖减慢,划痕和Transwell实验显示迁移和侵袭能力降低,qPCR、WB和免疫荧光显示GLUT1、LDHA和PKM2表达下降。
研究意义
研究为结肠癌的诊断、治疗和预防提供了潜在生物标志物,靶向ENTR1抑制糖酵解可能是一种新的癌症治疗策略。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

生物信息学分析ENTR1表达与临床相关性

分析ENTR1在多种癌症中的表达水平及其与预后的关系。

利用TCGA、CPTAC、HPA等数据库分析ENTR1在肿瘤和正常组织中的mRNA和蛋白表达,以及其与OS、DSS、DFI、PFI的相关性。

2

孟德尔随机化分析因果关联

评估ENTR1表达与结肠癌的潜在因果关系。

使用SMR分析结合eQTL和GWAS数据,以及代谢物MR分析。

3

细胞实验验证功能

验证ENTR1对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和糖酵解的影响。

在HCT-116细胞中使用siRNA敲低ENTR1,然后进行CCK-8、活/死染色、划痕、Transwell、qPCR、WB和免疫荧光检测。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
McCoy's 5A培养基----
胎牛血清----
AG RNAex Pro RNA提取试剂盒Accurate Biotechnology--
Evo M-MLV逆转录试剂盒Accurate Biotechnology--
SYBR Green Pro Taq HS qPCR试剂盒Accurate Biotechnology--
CFX Duet实时荧光定量PCR系统BIO-RAD--
RIPA裂解液Solarbio--
SDS-PAGE上样缓冲液Beyotime--
PVDF膜----
快速封闭液Servicebio--
抗GLUT1抗体Santa Cruzsc-377228
抗ENTR1抗体Santa Cruzsc-398909
抗LDHA抗体Proteintech19987-1-AP
抗PKM2抗体Proteintech60268-1-Ig
抗β-肌动蛋白抗体ServicebioGB15003-100
二抗ProteintechSA00001-1
二抗ProteintechSA00001-2
Lipofectamine 3000转染试剂Thermo Fisher Scientific--
CCK-8试剂盒Biosharp--
Calcein/PI细胞活力与细胞毒性检测试剂盒Beyotime--
激光共聚焦培养皿Nest--
荧光显微镜DMi8Leica--
Triton X-100Solarbio--
山羊血清Gibco--
抗GLUT1抗体Santa Cruzsc-377228
抗ENTR1抗体Santa Cruzsc-398909
抗LDHA抗体Proteintech19987-1-AP
抗PKM2抗体Proteintech60268-1-Ig
二抗ProteintechRGAM004
二抗ProteintechRGAR004
DAPI染色液Solarbio--
FITC标记的鬼笔环肽Biosharp--
共聚焦激光扫描显微镜FV3000Olympus--
基质胶Beyotime--
结晶紫Beckman--
AlphaFold 3----
PyMOL----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
细胞培养
HCT-116细胞系来源,培养基,FBS浓度,培养条件(37°C, 5% CO2)
阅读提示:Materials and methods, Cell culture
siRNA转染
siRNA序列,转染试剂(Lipofectamine 3000),转染条件
阅读提示:Materials and methods, siRNA transfection
细胞增殖检测
细胞接种数量,检测时间点,CCK-8孵育时间,波长
阅读提示:Materials and methods, Cell Proliferation
迁移/侵袭实验
细胞数量,血清浓度,基质胶浓度,孵育时间
阅读提示:Materials and methods, Cell migration and invasion
分子表达检测
抗体稀释比例,引物序列,内参基因
阅读提示:Materials and methods, Western blotting, qRT-PCR, Immunofluorescence