Lamin A/C通过以HBx依赖的方式调节与cccDNA微染色体相关的组蛋白修饰来促进HBV转录

背景：慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染仍然是一个严重的公共卫生挑战，由于HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）在细胞核中的持续存在，主要治疗策略无法治愈HBV感染。HBV X蛋白（HBx）在调节cccDNA转录中起着关键作用。因此，靶向HBx以鉴定调节cccDNA转录的宿主蛋白可能代表一种治愈方法。方法：在这里，我们使用免疫共沉淀（co-IP）和质谱（MS）来鉴定与HBx相互作用的蛋白质。通过RNA干扰敲低候选蛋白Lamin A和C（Lamin A/C），并通过慢病毒载体在HBV感染的细胞培养物中过表达Lamin A/C。使用染色质免疫沉淀（ChIP）结合定量PCR（ChIP-qPCR）研究蛋白质-DNA相互作用。结果：一项机制研究表明，Lamin A/C与HBx结合，导致HBx被26S蛋白酶体降解减少。此外，Lamin A/C在体外调节HBV cccDNA转录，这与HBx相关。此外，Lamin A/C敲低导致HBV cccDNA转录沉默，但在HBV-HBx缺失（∆HBx）感染的细胞中则不然。重要的是，实验性敲低Lamin A/C降低了与cccDNA结合的活性组蛋白修饰（H3K4me3和H3K27Ac）的水平，并增加了与cccDNA结合的抑制性组蛋白修饰（H3K9me3和H3K27me3）的水平，这在HBV-∆HBx系统中被抑制。结论：我们的研究结果表明，Lamin A/C通过一种可以与HBx相互作用并防止其降解的表观遗传调控机制，作为HBV cccDNA的一个新的宿主因子。