动物模型建立与分组干预
评估氢化镁对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的保护作用
18只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、高脂饮食组和高脂饮食+氢化镁组,喂养12周。
Dietary addition of magnesium hydride nanoparticles: a breakthrough in combating high-fat diet-induced chronic kidney disease.
包含体内小鼠模型和体外HK-2细胞模型,并进行功能验证(肾功能、纤维化指标)和机制验证(通路蛋白、抑制剂和过表达实验)。
C57BL/6小鼠高脂饮食模型 HK-2人肾皮质近端小管上皮细胞
小鼠周龄8周、体重21-24g,每组6只 高脂饮食脂肪能量占比60%,氢化镁饲料浓度0.5 g/kg 棕榈酸浓度200 μM处理HK-2细胞 转染质粒浓度2 μg PTEN抑制剂SF1670浓度5 μM
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估氢化镁对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的保护作用
18只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、高脂饮食组和高脂饮食+氢化镁组,喂养12周。
检测氢化镁对高脂饮食小鼠肾功能的改善作用
检测血清尿素氮和肌酐水平,肾组织进行HE和PAS染色,检测KIM-1和NGAL蛋白表达。
验证氢化镁对肾脂质沉积和纤维化的缓解作用
检测纤维化标志物Vimentin、FN、E-cadherin表达,脂滴染色,免疫荧光和免疫组化检测。
阐明氢化镁发挥保护作用的分子机制
通过KEGG富集分析,体内外检测TGF-β/Smad2/3和AKT/mTOR通路蛋白表达,使用PTEN抑制剂SF1670和HES1过表达验证。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物饲养 | C57BL/6小鼠 | Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., Ltd. | SCXK 2018-004 |
| 高脂饮食 | 高脂饮食 | Wuxi Fanbo Biotechnology Co., Ltd. | -- |
| 细胞培养 | HK-2细胞 | Wuhan Pricella Biotechnology Co., Ltd. | CL-0109 |
| DMEM/F-12培养基 | Servicebio | G4610-500ML | |
| 胎牛血清 | -- | -- | |
| 细胞培养箱 | Esco Micro Pte. Ltd. | -- | |
| 药物处理 | 棕榈酸 | MedChemExpress | -- |
| 细胞转染 | 对照质粒 | Genomeditech | -- |
| HES1过表达质粒 | Genomeditech | -- | |
| 荧光显微镜 | Leica | -- | |
| 免疫组织化学 | TGF-β抗体 | Proteintech | 21898-1-AP |
| 纤维连接蛋白抗体 | CST | 26836 | |
| 二抗(山羊抗兔) | Abcam | ab205718 | |
| 免疫荧光 | 波形蛋白抗体 | Proteintech | 60330-1-Ig |
| E-钙黏蛋白抗体 | Proteintech | 20874-1-AP | |
| TGF-β抗体 | Proteintech | 21898-1-AP | |
| Smad2抗体 | Cloud-clone Corp | PAC124Hu01 | |
| Alexa Fluor 488标记的山羊抗兔抗体 | Abcam | ab150077 | |
| 细胞活性检测 | CCK-8试剂盒 | MedChemExpress | -- |
| SF1670 | MedChemExpress | -- | |
| 酶标仪 | BioTek | -- | |
| Western blot | 蛋白定量试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 硝酸纤维素膜 | GE | -- | |
| NGAL抗体 | Cloud-clone Corp. | PAB388Mu01 & PAB388Hu01 | |
| KIM-1抗体 | Cloud-clone Corp. | PAA785Mu01 & PAA785Hu01 | |
| 波形蛋白抗体 | Proteintech | 60330-1-Ig | |
| 纤维连接蛋白抗体 | CST | 26836 | |
| E-钙黏蛋白抗体 | Proteintech | 20874-1-AP | |
| β-肌动蛋白抗体 | Proteintech | 66009-1-Ig | |
| TGF-β抗体 | Proteintech | 21898-1-AP | |
| Smad2抗体 | Cloud-clone Corp. | PAC124Mu01 & PAC124Hu01 | |
| Smad3抗体 | Cloud-clone Corp. | PAC123Mu01 & PAC123Hu01 | |
| p-Smad2抗体 | CST | 18338 | |
| p-Smad3抗体 | CST | 9520 | |
| PTEN抗体 | CST | 9559 | |
| p-AKT抗体 | CST | 4060 | |
| mTOR抗体 | CST | 2983 | |
| p-mTOR抗体 | CST | 5536 | |
| HES1抗体 | CST | 11988 | |
| 抗兔HRP标记抗体 | CST | 14786 | |
| 双色热成像技术 | Tanon | -- | |
| RT-qPCR | TRIzol试剂 | Invitrogen | -- |
| 逆转录试剂盒 | Yeasen | -- | |
| SYBR Green染料 | Yeasen | -- | |
| RNA-seq | RNA转录组测序 | Gene Denovo Bioinformatics Analysis Platform | -- |
| 脂滴检测 | Lipi-Blue荧光探针 | DOJINDO | LD01 |
| 统计分析 | GraphPad软件8.0 | GraphPad Software | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 小鼠品系、性别、周龄、体重、饲养条件、随机分组方式、每组样本量、高脂饮食脂肪占比、氢化镁剂量、给药途径、干预持续时间 阅读提示:Materials and Methods - Animals及Figure 1A |
| 细胞模型 | HK-2细胞来源、培养条件、棕榈酸浓度、氢化镁浓度、血清饥饿时间、细胞融合度、处理时间 阅读提示:Materials and Methods - Cell culture and intervention |
| 转染实验 | 质粒浓度、转染试剂、转染时间、细胞系 阅读提示:Materials and Methods - Cell culture and intervention |
| 通路验证 | SF1670浓度、蛋白抗体货号、过表达HES1对通路蛋白的影响 阅读提示:Materials and Methods - Western blot analysis, Results - Figure 4 and 5 |