建立PCOS模型
建立体内和体外PCOS模型以模拟疾病状态
使用DHEA诱导大鼠PCOS模型,使用DHT诱导KGN细胞PCOS模型
Formononetin ameliorates polycystic ovary syndrome through suppressing NLRP3 inflammasome.
包含体内大鼠模型和体外细胞模型,通过组织学、ELISA、TUNEL、Western blot、流式细胞术等多方法验证功能,并利用Nigericin进行机制挽救实验。
DHEA诱导的PCOS大鼠模型 DHT诱导的KGN细胞模型
大鼠分组:对照组、PCOS组、PCOS+FMN(15、30、60 mg/kg)组,每组10只 DHEA给药:皮下注射60 mg/kg/天,连续21天 FMN给药:口服灌胃15、30、60 mg/kg,每日一次,连续21天 细胞模型:KGN细胞,DHT 500 nM处理24小时 FMN处理:12.5、25、50 μmol/L处理24小时 Nigericin作为NLRP3激活剂用于挽救实验
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立体内和体外PCOS模型以模拟疾病状态
使用DHEA诱导大鼠PCOS模型,使用DHT诱导KGN细胞PCOS模型
观察FMN对PCOS大鼠症状的改善作用
检测动情周期、卵巢组织学变化、性激素水平和胰岛素抵抗指标
评估FMN对PCOS模型炎症、凋亡和氧化应激的影响
检测炎症因子mRNA水平、TUNEL凋亡、凋亡相关蛋白表达、GSH含量和SOD、CAT活性
探究FMN是否通过抑制NLRP3炎症小体发挥保护作用
通过分子对接和KEGG富集分析预测,再通过Western blot和免疫荧光检测NLRP3、ASC和caspase-1的表达
验证FMN的作用是否依赖于抑制NLRP3炎症小体
在DHT诱导的KGN细胞中,使用Nigericin激活NLRP3,观察FMN的作用是否被逆转
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物模型 | 脱氢表雄酮 | Sigma-Aldrich | -- |
| 芒柄花素 | Yuanye | -- | |
| 激素检测 | 大鼠LH ELISA试剂盒 | Solarbio | SEKR-0091 |
| 大鼠FSH ELISA试剂盒 | Solarbio | SEKR-0090 | |
| 睾酮ELISA试剂盒 | Solarbio | SEKSM-0003 | |
| 大鼠E2 ELISA试剂盒 | Solarbio | SEKR-0107 | |
| 胰岛素抵抗检测 | 胰岛素ELISA试剂盒 | Solarbio | SEKR-0033 |
| 血糖含量检测试剂盒 | Solarbio | BC2495 | |
| 氧化应激检测 | 还原型谷胱甘肽含量检测试剂盒 | Solarbio | -- |
| 超氧化物歧化酶活性检测试剂盒 | Solarbio | -- | |
| 过氧化氢酶活性检测试剂盒 | Solarbio | -- | |
| RNA提取 | TRIzol试剂 | Invitrogen | -- |
| RT-qPCR | Revert Aid第一链cDNA合成试剂盒 | Thermo Scientific | -- |
| UltraSYBR一步法RT-qPCR试剂盒 | Cwbio | -- | |
| Western blot | RIPA裂解液 | Santa Cruz Biotechnology | -- |
| Bcl-2抗体 | Proteintech | 26593-1-AP | |
| Bax抗体 | Proteintech | 50599-2-Ig | |
| Cleaved caspase-3抗体 | Cell Signaling | 9661 | |
| NLRP3抗体 | Abcam | ab263899 | |
| ASC抗体 | Abcam | ab309497 | |
| caspase-1抗体 | Cell Signaling | 83383 | |
| GAPDH抗体 | Proteintech | 10494-1-AP | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG | Abcam | ab270144 | |
| ECL蛋白质印迹底物 | Solarbio | -- | |
| 细胞培养 | DMEM/F12培养基 | HuanKai Biology | -- |
| 胎牛血清 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 青霉素/链霉素 | Sigma | -- | |
| 细胞模型 | 二氢睾酮 | Selleck | -- |
| 尼日利亚菌素 | MCE | -- | |
| 细胞活力检测 | 细胞计数试剂盒-8 | Beyotime | -- |
| 细胞凋亡检测 | Annexin V-FITC | BD Biosciences | -- |
| 碘化丙啶 | Beyotime | -- | |
| 免疫荧光 | NLRP3抗体 | Proteintech | 27458-1-AP |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 大鼠PCOS模型建立 | 大鼠品系、性别、周龄;DHEA剂量、给药方式、给药天数 阅读提示:Methods: Rat PCOS model |
| FMN给药 | FMN剂量(15, 30, 60 mg/kg)、给药方式、给药频率、给药时长 阅读提示:Methods: Rat PCOS model |
| 性激素和胰岛素抵抗检测 | ELISA试剂盒型号、血糖检测方法、HOMA-IR计算公式 阅读提示:Methods: Detection of hormone levels, Insulin resistance assay |
| 细胞PCOS模型建立 | 细胞系(KGN)、DHT浓度、处理时间、FMN浓度和处理时间 阅读提示:Methods: Cell culture and treatment |
| NLRP3炎症小体抑制验证 | 分子对接的结合亲和力、Western blot检测的蛋白(NLRP3, ASC, caspase-1)、抗体信息 阅读提示:Results: FMN inhibited the activation of the NLRP3 inflammasome in DHEA-induced PCOS rats; Methods: Western blotting, Immunofluorescent staining |
| Nigericin挽救实验 | Nigericin的浓度、处理时间、分组(DHT+FMN±Nigericin) 阅读提示:Results: Nigericin abolished the effects of FMN on inflammation, apoptosis, and oxidative stress in DHT-induced KGN cells; Methods: Cell culture and treatment |