GREB1L过表达与乳腺癌良好的临床预后相关

GREB1L overexpression is associated with good clinical outcomes in breast cancer.

作者信息Ke Dong, Chenchen Geng, Xiaohong Zhan, Zhi Sun, Qian Pu, Peng Li, Haiyun Song, Guanghui Zhao, Haidong Gao
PMID37964281
发布时间2023-11-14
DOI10.1186/s40001-023-01483-y

实验完整度

包含生物信息学分析、临床样本验证、细胞功能实验(迁移、侵袭、增殖)以及体内异种移植模型等多层级证据,并进行了机制探讨。

主要模型

乳腺癌细胞系MCF7和MDA-MB-231 乳腺癌组织样本 BALB/c裸鼠皮下异种移植模型

重点核对

TCGA数据库中GREB1L在乳腺癌与正常组织中的表达差异 Kaplan-Meier分析中高/低GREB1L表达与OS和RFS的相关性 GREB1L敲低后MCF7和MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的变化 体内实验中GREB1L敲低对肿瘤生长和EMT标志物表达的影响

摘要

背景:乳腺癌是全球女性中最常见的恶性肿瘤。GREB1L是一种蛋白质编码基因。既往研究表明,GREB1L在肺腺癌和胃腺癌中发挥重要作用。目前,关于其在乳腺癌中的作用尚无相关报道。方法:使用癌症基因组图谱数据库比较肿瘤与正常组织中GREB1L的表达水平。使用TISIDB网站进行预后分析。使用LinkedOmics数据库预测GREB1L在乳腺癌中的潜在生物学机制。采用免疫组织化学法检测乳腺组织中GREB1L的表达水平。采用Western blotting检测细胞系中GREB1L的表达水平。采用Transwell实验、CCK-8细胞增殖实验和集落形成实验检测细胞的迁移、侵袭、增殖和集落形成能力。采用皮下异种移植模型检测细胞的体内成瘤能力。结果:GREB1L在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中高表达。KEGG富集分析提示GREB1L参与Hedgehog信号通路的调控;GREB1L表达的改变影响MCF7和MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。虽然GREB1L表达的改变在体外和体内均不影响其增殖和集落形成能力,但影响体内肿瘤转移相关基因的表达。乳腺癌中GREB1L的过表达预示良好的预后。结论:这些结果表明GREB1L参与乳腺癌的发生发展,可能成为预测乳腺癌预后的潜在分子标志物。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
GREB1L在乳腺癌中的表达水平及其与预后的关系,以及其对乳腺癌细胞功能的影响和潜在机制。
核心机制
GREB1L可能通过调控Hedgehog信号通路影响乳腺癌的迁移和侵袭能力,其低表达促进上皮-间质转化(EMT)过程。
主要证据
TCGA数据分析显示GREB1L在乳腺癌中高表达且与良好预后相关;Transwell实验显示敲低GREB1L增强细胞迁移和侵袭;体内实验显示敲低影响EMT标志物表达。
研究意义
GREB1L可能作为预测乳腺癌预后的独立生物标志物,为乳腺癌预后评估提供新的指标。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

生物信息学分析

初步评估GREB1L在乳腺癌中的表达水平及预后价值。

利用TCGA数据库比较GREB1L在肿瘤与正常组织中的表达,并利用Kaplan-Meier Plotter分析其与生存的关系。

2

临床样本验证

验证GREB1L在乳腺癌组织中的蛋白表达水平。

利用免疫组化检测乳腺癌及癌旁组织中GREB1L的表达。

3

细胞系表达鉴定

检测GREB1L在乳腺癌细胞系中的表达水平。

利用Western blot和qPCR检测MCF10A及乳腺癌细胞系中GREB1L的表达。

4

细胞功能实验

探究GREB1L对乳腺癌细胞迁移、侵袭、增殖及集落形成能力的影响。

在MCF7和MDA-MB-231细胞中敲低GREB1L,进行Transwell迁移和侵袭实验、CCK-8增殖实验和集落形成实验。

5

体内实验

验证GREB1L在体内对肿瘤生长和转移相关基因表达的影响。

将敲低GREB1L的MDA-MB-231细胞皮下注射到裸鼠,测量肿瘤大小和重量,并通过Western blot检测肿瘤中EMT标志物的表达。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
DMEM培养基BIC3113
DMEM/F12培养基ProcellCM-0525
RPMI-1640培养基ProcellPM150110
L-15培养基ProcellPM151010
胎牛血清BIC04001
青霉素-链霉素溶液ProcellPB180120
HitransG P----
Transwell小室Corning#3422
Matrigel基质胶ABW082704
CCK-8试剂盒DojindoCK04
TRIzol试剂TIANGEN Biotech--
All-In-One 5X RT MasterMixabm--
BlasTaq 2X qPCR MasterMixAbm--
GAPDH引物Sangon Biotech--
RIPA裂解液Solarbio#R0010
PVDF膜Immobilon-PIPVH00010
封闭液BosterAR0041
GREB1L抗体ATLAS ANTIBODIESHPA041647
β-微管蛋白抗体absinabs830032
E-钙黏蛋白抗体Cell Signaling Technology14472S
N-钙黏蛋白抗体Cell Signaling Technology13116S
波形蛋白抗体Cell Signaling Technology5471S
HRP标记的山羊抗小鼠IgGEarthoxE030110
HRP标记的山羊抗兔IgGEarthoxE030120
BALB/c裸鼠Charles River--
胰岛素----
马血清----
表皮生长因子----
氢化可的松----
非必需氨基酸----
嘌呤霉素----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
生物信息学分析
TCGA数据版本及样本量(1083例肿瘤,111例正常),分组方法(中位数),统计方法(Wilcoxon秩和检验、log-rank检验、Cox回归)
阅读提示:Methods中'Data source and online analysis tool'和'Prognostic value'部分
细胞培养
细胞系来源和培养条件(培养基、血清浓度、添加因子)
阅读提示:Methods中'Specimens and cells'部分
基因敲低
shRNA序列、转染试剂及步骤
阅读提示:Methods中'Lentiviral construction and transfection'部分
迁移和侵袭实验
细胞接种数、孵育时间、基质胶浓度、染色方法
阅读提示:Methods中'Transwell migration and invasion assays'部分
体内实验
动物品系、周龄、性别、细胞接种数、测量频率、实验周期
阅读提示:Methods中'Subcutaneous xenograft models in vivo'部分