LncRNA TM1-3P通过miR-144-3p/ONECUT2轴调控骨关节炎成纤维细胞增殖、凋亡和炎症

目的：本研究探讨LncRNA TM1‐3P对骨关节炎（OA）成纤维细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响及其潜在机制。方法：采用生物信息学分析OA疾病相关基因、miRNA谱和功能。通过双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）和RNA pull down分析LncRNA TM1‐3P与miR‐144‐3p、ONECUT2与miR‐144‐3p的靶向调控关系。通过苏木精–伊红（HE）和Annona Red O/Fast Green染色观察膝关节组织病理形态。通过RT‐qPCR、Western blot和免疫组织化学检测mRNA和蛋白的表达。组间比较采用非配对T检验，多组比较采用重复测量数据单因素方差分析，随后进行Tukey事后检验。结果：与正常组相比，骨关节炎组ONECUT2和Smurf2基因显著升高（P < 0.001，P < 0.001）。在白细胞介素（IL）‐1β诱导的人成纤维滑膜细胞（hFSCs）中，ONECUT2和LncRNA TM1‐3P表达升高，miR‐144‐3p表达降低（mRNA：1.06 ± 0.24 vs. 3.29 ± 0.73，蛋白：0.22 ± 0.03 vs. 0.46 ± 0.22，1.23 ± 0.22 vs. 3.76 ± 0.73，1.06 ± 0.25 vs. 0.37 ± 0.13，P < 0.01，P < 0.001，P < 0.01，P < 0.05）。miR‐144‐3p过表达下调ONECUT2表达，降低IL‐1β诱导的hFSCs增殖，促进凋亡（mRNA：0.89 ± 0.14 vs. 0.15 ± 0.01，P < 0.05；蛋白：0.46 ± 0.01 vs. 0.23 ± 0.01，P < 0.001；CCK8：1.88 ± 0.07 vs. 1.65 ± 0.07；P < 0.05；EDU：55.82 ± 1.44 vs 40.57 ± 2.24，P < 0.05；凋亡：10.57 ± 0.79 vs 16.36 ± 0.35，P < 0.0001）。LncRNA TM1‐3P过表达上调ONECUT2表达，促进细胞增殖，抑制凋亡（mRNA：0.9 ± 0.09 vs 1.94 ± 0.12，P < 0.05；蛋白：0.61 ± 0.05 vs 0.76 ± 0.03，P > 0.05；CCK8：2.07 ± 0.05 vs 2.47 ± 0.06；P < 0.01；EDU：52.67 ± 1.17 vs 60.06 ± 3.24，P < 0.05；凋亡：10.57 ± 0.79 vs 16.36 ± 0.35，P < 0.001），这些效应被miR‐144‐3p过表达处理逆转（mRNA：1.82 ± 0.07 vs 0.31 ± 0.07，P < 0.0001；蛋白：0.74 ± 0.02 vs 0.35 ± 0.01，P < 0.01；CCK8：2.41 ± 0.01 vs 1.67 ± 0.02；P < 0.0001；EDU：66.85 ± 2.86 vs 44.68 ± 1.97，P < 0.0001；凋亡：7.19 ± 0.19 vs 13.36 ± 0.53，P < 0.0001）。沉默LncRNA TM1‐3P减轻大鼠膝关节组织损伤，下调ONECUT2、Smurf2、IL‐1β、IL‐6、TNF‐α表达，并改善Rap1表达（0.71 ± 0.04 vs 0.48 ± 0.02，0.68 ± 0.06 vs 0.36 ± 0.02，0.74 ± 0.03 vs 0.49 ± 0.04，0.78 ± 0.01 vs 0.54 ± 0.03，0.68 ± 0.02 vs 0.4 ± 0.04，0.24 ± 0.01 vs 0.4 ± 0.03，P < 0.05，P < 0.05，P < 0.05，P < 0.01，P < 0.01，P < 0.05）。结论：LncRNA TM1‐3P通过miR‐144‐3p/ONECUT2轴改善OA大鼠膝关节炎症和损伤，为OA的基因治疗提供新的理论基础。