体外细胞活力筛选
评估teadenol B对四种乳腺癌细胞活力的抑制作用。
四种乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MDA-MB-453、MCF-7、BT474)分别用不同浓度teadenol B处理24小时,MTT法检测细胞活力,以紫杉醇为阳性对照。
Teadenol B as a Component of Microorganism-Fermented Tea Extract Inhibited Breast Cancers by Promoting Autophagy.
包含体外细胞活力、蛋白质组学、体内移植瘤模型及自噬/凋亡蛋白检测等多层次实验,但缺乏机制验证(如自噬抑制剂/激活剂干预)和DCTD直接调控实验。
MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞 MDA-MB-453乳腺癌细胞 MCF-7乳腺癌细胞 BT474乳腺癌细胞 MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型
teadenol B浓度梯度处理四种乳腺癌细胞24小时,MTT法检测细胞活力 蛋白质组学处理条件:20 µg/mL teadenol B作用1小时 裸鼠移植瘤模型中teadenol B给药剂量75 mg/kg,每3天一次,口服给药4周,样本量每组10只 Western blot检测自噬相关蛋白(LC3、SQSTM1)和凋亡相关蛋白(caspase-3、caspase-9)的条件:teadenol B浓度40、80 µg/mL,处理1和4小时
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估teadenol B对四种乳腺癌细胞活力的抑制作用。
四种乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MDA-MB-453、MCF-7、BT474)分别用不同浓度teadenol B处理24小时,MTT法检测细胞活力,以紫杉醇为阳性对照。
探索teadenol B抗乳腺癌的潜在机制,寻找关键差异蛋白。
四种乳腺癌细胞经teadenol B处理后提取蛋白,进行无标记质谱分析,筛选差异表达蛋白,并进行KEGG通路富集分析。
验证teadenol B对三阴性乳腺癌体内生长的抑制作用及其安全性。
将MDA-MB-231细胞接种裸鼠,待肿瘤长至1 cm³后切成小块移植至20只裸鼠,随机分对照组和治疗组,口服给予teadenol B或溶剂,监测肿瘤体积和体重。
验证teadenol B是否通过诱导凋亡和促进自噬发挥抑制乳腺癌细胞作用。
MDA-MB-231细胞经teadenol B处理后,用流式细胞术检测凋亡,通过Western blot检测凋亡相关蛋白(caspase-9、caspase-3、BCL2)和自噬相关蛋白(LC3、SQSTM1、BECN1)的变化。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | 含酚红的L-15培养基 | Jinuo | -- |
| 含酚红的MEM培养基 | Meilunbio | MA0217 | |
| 含酚红的RPMI 1640培养基 | Meilunbio | MA0215 | |
| 无酚红RPMI 1640培养基 | TBD | 11835 | |
| 胎牛血清 | Sijiqing | 11011-8611 | |
| 胰岛素 | Aladdin | 118975 | |
| 细胞活力检测 | 紫杉醇 | Aladdin | P106869 |
| MTT溶液 | Kerui | -- | |
| 二甲基亚砜 | SCR | 30072418 | |
| 酶标仪 | Tecan | Spark | |
| 蛋白质组学 | 质谱仪 | Thermo Fisher | Orbitrap Fusion |
| 动物实验 | 基质胶 | Corning | 356231 |
| 羧甲基纤维素钠 | AbMole | M9317 | |
| Western blot | BECN1抗体 | Proteintech | 66665-1-Ig |
| Caspase-3抗体 | Abclonal | A19654 | |
| Caspase-9抗体 | Proteintech | 10380-1-AP | |
| DCTD抗体 | Proteintech | 68357-1-Ig | |
| MAP1LC3抗体 | Proteintech | 14600-1-AP | |
| SQSTM1抗体 | Proteintech | 66184-1-Ig | |
| β-actin抗体 | Proteintech | 66009-1-Ig | |
| HRP标记亲和纯化山羊抗鼠IgG(H+L) | Proteintech | SA00001-1 | |
| 增强型HRP-DAB显色底物试剂盒 | Tiangen | 4994100 | |
| 凋亡检测 | Annexin V-FITC/PI染色试剂盒 | Procell | P-CA-201 |
| 流式细胞仪 | Beckman | CytoFLEX S |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养 | 细胞系来源、培养基成分及添加物、培养条件(温度、CO2) 阅读提示:Materials and Methods 3.1 Cell Culture |
| 细胞活力检测 | 细胞密度、teadenol B浓度范围、处理时间、MTT浓度、检测波长、重复次数 阅读提示:Materials and Methods 3.2 MTT Assays |
| 蛋白质组学 | 处理浓度和时间、细胞数量、质谱平台、数据搜库参数 阅读提示:Materials and Methods 3.3 Proteomic Sample Preparation 和 3.4 Label-Free MS Analysis |
| 动物实验 | 动物品系、周龄、体重、细胞接种量、移植方式、分组、给药剂量、途径、频率、持续时间、肿瘤测量方法 阅读提示:Materials and Methods 3.5 Human Breast Cancer Xenograft Nude Mice Model |
| 蛋白检测 | 药物浓度、处理时间、抗体稀释度、显色方法 阅读提示:Materials and Methods 3.6 Western Blot |
| 凋亡检测 | 细胞密度、处理条件、染色步骤、流式细胞仪设置 阅读提示:Materials and Methods 3.7 Apoptosis Assay |