ITLN-1敲除小鼠模型评估自发BPH
探究ITLN-1缺失对BPH发展的影响
使用5月龄和10月龄的Itln-1−/−小鼠及其野生型同窝小鼠,检测体重、前列腺重量、前列腺指数、血清PAP水平,并通过H&E染色评估前列腺组织形态学变化。
Omentin-1 inhibits the development of benign prostatic hyperplasia by attenuating local inflammation.
包含Itln-1敲除小鼠模型、TP诱导BPH小鼠模型及体外细胞实验等多个独立证据层级,并通过组织学、ELISA、Western blot等功能验证和机制探讨。
Itln-1基因敲除小鼠(Itln-1−/−) TP诱导的BPH小鼠模型 BPH-1人前列腺增生细胞系 RAW264.7小鼠巨噬细胞系
Itln-1敲除小鼠与野生型同窝对照的年龄和性别匹配 TP诱导BPH的小鼠周龄、给药剂量(5 mg/kg/天)和给药时间(28天) 腺病毒Ad-Itln-1或Ad-GFP的注射剂量(1×10^8 PFU)和注射频率(每周两次) ITLN-1处理浓度(300 ng/mL)及TNF-α刺激浓度(10 ng/mL) 阳性对照药物非那雄胺的给药方式和剂量(文中未明确说明)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
探究ITLN-1缺失对BPH发展的影响
使用5月龄和10月龄的Itln-1−/−小鼠及其野生型同窝小鼠,检测体重、前列腺重量、前列腺指数、血清PAP水平,并通过H&E染色评估前列腺组织形态学变化。
评估ITLN-1缺乏对前列腺局部炎症的影响
通过ELISA检测血清TNF-α水平,并使用免疫组化染色评估前列腺组织中TNF-α的表达。
验证ITLN-1是否直接或通过调节巨噬细胞炎症间接抑制BPH-1细胞增殖
用重组ITLN-1处理BPH-1细胞,测定细胞活力;同时用TNF-α和/或ITLN-1处理RAW264.7巨噬细胞,收集条件培养基(CM)处理BPH-1细胞,检测细胞活力和EdU阳性率,并检测CM中细胞因子水平。
评估ITLN-1过表达对TP诱导的BPH小鼠的治疗作用
对2月龄雄性C57BL/6小鼠连续28天皮下注射TP(5 mg/kg)诱导BPH,然后分组给予Ad-Itln-1、Ad-GFP、非那雄胺或对照,检测前列腺重量、前列腺指数、血清PAP,并评估组织形态和TNF-α表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Gibco | 11965092 |
| 胎牛血清 | CellMax | SA301.02 | |
| 青霉素-链霉素 | Solarbio | P1400 | |
| RPMI 1640培养基 | VivaCell | C3010-0500 | |
| RAW264.7细胞系 | Procell Life Science & Technology | CL-0190 | |
| 炎症诱导 | 肿瘤坏死因子-α | PeproTech | 300-01A |
| 药物处理 | 重组ITLN-1蛋白 | Abbexa | abx067296 |
| 细胞增殖检测 | CCK-8试剂盒 | TargetMol | C0005 |
| Yefluor 594 Click-iT EdU成像试剂盒 | Yeasen | 40276ES60 | |
| 细胞染色 | DAPI | Vectorlabs | H-1200 |
| 免疫组织化学 | TNF-α抗体 | Proteintech | 17590 |
| HRP标记的二抗 | ZenBio | 511203 | |
| ELISA分析 | 小鼠PAP ELISA试剂盒 | JingMei Biotechnology | JM-02750M2 |
| TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience | 70-EK282/4-96 | |
| IL-2 ELISA试剂盒 | Elabscience | 70-EK202/2-96 | |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Elabscience | 70-EK206/3-96 | |
| 蛋白质提取 | 含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液 | -- | -- |
| 蛋白定量 | BCA蛋白定量试剂盒 | Elabscience | E-BC-K318-M |
| Western blot | ITLN-1抗体 | Proteintech | 11770-1-A |
| qRT-PCR | TRIzol试剂 | AG | AG21102 |
| All-in-One cDNA合成预混液 | Novoprotein | E047 | |
| 2× SYBR Green qRT-PCR预混液 | Bimake | 21202 | |
| 仪器设备 | 酶标仪(Varioskan LUX) | Thermo Scientific | -- |
| Zeiss ApoTome荧光显微镜 | Zeiss | -- | |
| 光学显微镜(Olympus CX31) | Olympus | -- | |
| FTC-3000实时荧光定量PCR系统 | Funglyn Biotech | -- | |
| 图像分析 | Image-Pro Plus 6.0软件 | -- | -- |
| ImageJ软件 | -- | -- | |
| 统计分析 | GraphPad Prism 7.0软件 | GraphPad | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养 | 细胞系来源和培养条件(DMEM/RPMI 1640,10% FBS,1% P/S,37°C,5% CO2) 阅读提示:Materials and methods: Cell culture |
| 炎症巨噬细胞模型 | TNF-α浓度(10 ng/mL)和刺激时间(30分钟);ITLN-1浓度(300 ng/mL)和处理时间(24小时) 阅读提示:Materials and methods: Preparation of conditioned culture medium from inflammatory macrophages |
| 细胞增殖检测 | 细胞接种密度(2×10^3/孔),处理时间(48小时),CCK-8试剂添加量(10 μL)及孵育时间(2小时),检测波长(450 nm) 阅读提示:Materials and methods: Cell counting kit-8 assay |
| 动物实验 | 小鼠品系/年龄/性别(C57BL/6,2月龄,雄性),TP剂量(5 mg/kg/天)和给药方式(皮下注射),腺病毒剂量(1×10^8 PFU)和注射方式(尾静脉),非那雄胺剂量和给药方式(文中未明确说明) 阅读提示:Materials and methods: Animals and treatments |
| 组织学分析 | 切片厚度(5 μm),H&E染色,TNF-α一抗稀释比例(1:200),二抗孵育时间(1小时),观察视野数(3个) 阅读提示:Materials and methods: Histomorphometry and immunohistochemical analyses |