小鼠选择与配对喂养
建立合适的动物模型并控制变量，确保实验组间营养摄入一致。
选用雄性C57BL/6J-219小鼠，进行配对喂养，乙醇组提供含乙醇饮水，配对组提供等热量麦芽糖糊精溶液，对照组提供标准饮食。
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幽门螺杆菌根除后慢性乙醇喂养建立胃癌小鼠模型的方案
Protocol for developing a mouse model of gastric cancer following Helicobacter pylori eradication and chronic ethanol feeding.
实验完整度
高方案包含H. pylori感染、根除、乙醇喂养、组织病理学、分子水平检测及体内模型验证，具备完整实验层级与验证。
主要模型
C57BL/6J-219小鼠模型
重点核对
H. pylori感染剂量为1×10^8 CFU/100 μL，通过口服灌胃给予 乙醇给药剂量为5 g/kg/天，持续至48周 H. pylori根除方案：奥美拉唑400 μmol/kg/天、甲硝唑14.2 mg/kg/天、克拉霉素7.15 mg/kg/天，每日两次，持续7天 主要终点为8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48周，每组5只小鼠（终点终末10只）
摘要
幽门螺杆菌（H. pylori）感染通过慢性炎症驱动胃癌。在此，我们提出一个方案，通过在H. pylori根除后进行慢性乙醇喂养，建立诱导持续性胃炎和肿瘤发生的小鼠模型，重现持续性胃炎以及癌前和癌性表型。我们描述了H. pylori感染、三联药物根除治疗和乙醇给药的步骤。随后的组织采集、组织病理学和分子分析评估炎症和肿瘤发展，从而能够研究根除后炎症和酒精暴露如何协同促进胃癌发生。关于此方案的完整使用和执行细节，请参阅Aziz等人的文献1。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 旨在探究H. pylori根除后持续酒精暴露是否通过维持炎症促进胃癌发生，并建立相应的小鼠模型。
- 核心机制
- 持续酒精暴露在H. pylori根除后维持胃炎，并通过IL-10抑制促进胃肿瘤发生。
- 主要证据
- 通过H. pylori感染、根除后乙醇喂养的小鼠模型，观察到肿瘤形成、组织学评分加重、炎症细胞浸润增加，以及Tff1、Tff2、Gkn1、Gkn2等肿瘤抑制基因表达降低。
- 研究意义
- 该模型模拟人类根除H. pylori后因持续饮酒导致胃癌发生的过程，为研究炎症驱动的胃癌发生及开发预防和治疗策略提供临床前平台。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
H. pylori感染与根除
建立H. pylori感染并实现根除，模拟临床治疗情景。
通过口服灌胃给予H. pylori SS1菌株，之后进行三联抗生素根除治疗，并确认根除成功。
根除后慢性乙醇喂养
评估根除后持续酒精暴露对胃炎和肿瘤发生的影响。
在确认H. pylori根除后，继续给予乙醇饮水16周，并定期监测炎症和胃部变化。
组织采集与病理学评估
评估胃部炎症、萎缩、异型增生和肿瘤形成。
在不同时间点处死小鼠，收集胃组织，进行大体观察、组织学评分、免疫组化染色（MPO、F4/80、Tff1、p53）和形态学分析。
分子生物学分析
评估炎症和肿瘤相关基因表达及蛋白水平。
提取RNA进行qRT-PCR分析肿瘤抑制基因（Tff1、Tff2、Gkn1、Gkn2等），提取蛋白进行Western blot，并通过ELISA检测血清细胞因子和CD8水平。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 组织学分析 | Tff1抗体 | Proteintech | 83467-2 |
| P53抗体 | Proteintech | 10442-1-AP | |
| MPO抗体 | Bioss | bs-4943R | |
| F4/80抗体 | Bioss | bs-7058R | |
| ELISA | CD-8 ELISA试剂盒 | Abcam | ab238264 |
| H. pylori CagA ELISA试剂盒 | MyBioSource | MBS263962 | |
| 细胞因子检测 | LEGENDplex小鼠炎症因子检测试剂盒 | BioLegend | 740446 |
| 生化分析 | 脲酶检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C013-2 |
| 丙二醛检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A003-1 | |
| 髓过氧化物酶检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A044 | |
| 羰基检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A087 | |
| 脂质过氧化物检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | -- | |
| 过氧化氢酶检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A007-1 |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 小鼠选择与配对喂养 | 小鼠品系：C57BL/6J-219；性别：雄性；年龄：8-10周；体重：>20 g；配对喂养方案 阅读提示：Methods: Before you begin, Considerations in mouse selection and strain |
| H. pylori感染与根除 | H. pylori菌株：SS1；感染剂量：1×10^8 CFU/100 μL；根除方案：奥美拉唑400 μmol/kg/天、甲硝唑14.2 mg/kg/天、克拉霉素7.15 mg/kg/天，每日两次，连续7天 阅读提示：Methods: Administration of H. pylori by oral gavage, Administration of antibiotics |
| 根除后慢性乙醇喂养 | 乙醇剂量：5 g/kg/天；持续时间：16周；饮水替换频率：每2-3天 阅读提示：Methods: Alcohol consumption after H. pylori eradication |
| 组织采集与病理学评估 | 时间点：8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48周；每组样本量：5只（终末10只）；组织处理：10%福尔马林固定、石蜡包埋、5 μm切片 阅读提示：Methods: Euthanasia and sample collection, Histological analysis |
| 分子生物学分析 | qRT-PCR引物序列（见表1）；内参基因：Rpl32；cDNA合成使用Takara Mastermix；qPCR使用Power SYBR Green PCR Master Mix 阅读提示：Methods: Quantitative real-time PCR analysis, Table 1 |