Puriton通过平衡Th1/Th2和抑制炎症减轻卵清蛋白诱导的小鼠模型中的哮喘严重程度

Puriton attenuates the asthma severity in ovalbumin-induced murine model via balancing Th1/Th2 and inhibiting inflammation.

作者信息So-Hyeon Bok, Hae Eun Jang, Kwang-Ho Kim, Dae-Hun Park
PMID40323927
期刊PLoS One
发布时间2025-05
DOI10.1371/journal.pone.0322792

实验完整度

包含OVA诱导小鼠哮喘模型(体内)、BALF细胞计数、血清IgE检测、组织病理学、免疫组织化学、免疫荧光等多层级验证,并覆盖功能与机制验证。

主要模型

BALB/c小鼠OVA诱导哮喘模型

重点核对

BALB/c雌性小鼠(8只/组,共5组) OVA(20 μg)与氢氧化铝(1 mg)腹腔注射致敏,第21-25天5% OVA雾化激发 Puriton剂量:700和1400 μL/头/天,口服;地塞米松1 mg/kg/天 BALF中WBC、NE、LY计数及血清IgE水平 肺组织H&E和PAS染色评估形态学变化 免疫组化检测Th1/Th2/Th17相关细胞因子,免疫荧光检测p-NF-κB和COX-2

摘要

2019年,估计有2.62亿哮喘患者,其中45.5万人死于哮喘。这是一种无法治愈的慢性炎症性呼吸系统疾病,在老年人和年轻人中更为严重。将40只BALB/c小鼠分为5组,每组8只:溶媒对照组(CON)、哮喘组(OVA)、阳性药物组(DEX)以及Puriton(700和1400 μL/头/天)组。动物实验后,所有小鼠被麻醉以收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和血液,然后麻醉以采集肺。测量BALF中的白细胞(WBC)和分类计数以及血清中的免疫球蛋白E(IgE)。肺组织用于组织病理学和免疫组织病理学研究。用Puriton治疗降低了WBC和中性粒细胞的数量以及IgE的水平。它阻止了OVA诱导的肺形态学变化,并增加了T辅助2(Th2)细胞相关细胞因子如白细胞介素(IL-)4、IL-5和IL-13的表达水平。它抑制了炎症细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6。核因子κB(NF-κB)/环氧合酶-2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)通路是一条重要的炎症通路。用Puriton治疗受试者导致细胞核和细胞质中磷酸化(p)-NF-κB、COX-2和PGE2的表达受到抑制。从结果我们得出结论,Puriton是治疗哮喘的有前途的候选药物。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
Puriton是否能减轻OVA诱导的小鼠哮喘严重程度,并通过调节Th1/Th2平衡和抑制炎症发挥治疗作用?
核心机制
Puriton通过抑制Th2细胞相关细胞因子(IL-4, IL-5, IL-13)和炎症细胞因子(TNF-α, IL-6),并下调NF-κB/COX-2/PGE2信号通路,从而减轻哮喘炎症反应。
主要证据
在OVA诱导的BALB/c小鼠模型中,Puriton剂量依赖性降低BALF中WBC、NE、LY计数和血清IgE水平,抑制肺组织形态学改变和黏液分泌,免疫组化和免疫荧光显示Th2细胞因子和p-NF-κB、COX-2、PGE2表达降低。
研究意义
作者提出Puriton是治疗哮喘的有前途的候选药物,并基于小鼠剂量估算人体剂量(233 mL/人),但需进一步研究以确定剂量依赖性。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

建立OVA诱导的哮喘小鼠模型

在BALB/c小鼠中通过OVA致敏和激发建立哮喘模型,以评估Puriton的治疗效果。

40只BALB/c雌性小鼠分为5组,于第1天和第8天腹腔注射20 μg OVA和1 mg氢氧化铝溶于500 μl生理盐水,第21-25天通过雾化器吸入5% OVA激发。

2

评估BALF细胞计数和血清IgE水平

量化哮喘模型中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和IgE的变化,以评估免疫炎症反应。

收集BALF和血清,使用Hemavet系统进行细胞计数,使用OptEIA Mouse Kit测量IgE水平。

3

组织病理学评估肺形态和黏液分泌

观察OVA诱导的肺组织形态学改变和黏液分泌,评估Puriton的保护作用。

肺组织固定、脱水、石蜡包埋,切片(5 μm)进行H&E和PAS染色,显微镜观察。

4

免疫组化分析Th1/Th2/Th17细胞因子和PGE2表达

检测肺组织中Th1、Th2、Th17相关细胞因子和炎症介质PGE2的表达变化,以阐明免疫调节机制。

使用ImmPRESS Universal Polymer Kit对肺切片进行免疫组化染色,使用特异性抗体检测IFN-γ、IL-12p40、IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、IL-6和PGE2,并计数阳性细胞。

5

免疫荧光分析p-NF-κB和COX-2表达

验证Puriton对NF-κB/COX-2信号通路关键蛋白活化的影响。

肺组织切片进行免疫荧光染色,使用抗p-NF-κB和抗COX-2抗体,以及荧光标记二抗,共聚焦显微镜观察。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
PuritonKadesh, Inc.KP0352101
地塞米松SAMNAM Pharm02450
卵清蛋白----
氢氧化铝水合物Sigma-Aldrich77161
磷酸盐缓冲液Walkersville17-516F
OptEIA Mouse KitBD Biosciences555248
M15R微量离心机Hanil Scientific--
Hemavet多物种血液学系统Drew Scientific--
Multiskan SkyHigh设备Thermo Fisher Scientific--
甲醛Daejung Chemicals & Metals4044-4400
石蜡Leica Biosystems39601006
伊红Merck MilliporeHX57865344
雪夫染色剂Merck MilliporeHX20146234
蔡司AX10 Scope A1显微镜Zeiss--
ImmPRESS通用聚合物试剂盒Vector LaboratoriesMP-7500
抗IFN-γ抗体Thermo Fisher ScientificMM700
抗IL-12p40抗体Santa Cruz Biotechnologysc-57258
抗IL-4抗体Santa Cruz Biotechnologysc-73318
抗IL-5抗体Biolegend504302
抗IL-13抗体Santa Cruz Biotechnologysc-1776
抗TNF-α抗体BioVision3053R-100
抗IL-6抗体Novus BiologicalsNBP1-77894
抗PGE2抗体Biossbs-2639R
抗p-NF-κB抗体InvitrogenMA5-15160
抗COX-2抗体InvitrogenPA1-9032
Alexa Fluor 488标记抗兔IgGInvitrogenA3273
Alexa Fluor 555标记抗山羊IgGInvitrogenA32816
DAPIThermo Fisher Scientific62249
K1-Fluo共聚焦显微镜Nanoscope System--
ZoletilVirbacBN 6NGW
雾化器NE-U17OMRON--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
动物分组与建模
BALB/c雌性小鼠(8周龄?)、分组(CON, OVA, DEX, Puriton低/高剂量)、OVA致敏剂量(20 μg)和佐剂(1 mg氢氧化铝)、雾化激发浓度和时间(5% OVA,30分钟,第21-25天)
阅读提示:Materials and Methods: Animal experiment
药物处理
Puriton剂量(700和1400 μL/头/天)、给药途径(口服)、给药时间(第21-25天,每日两次)、地塞米松剂量(1 mg/kg/天)
阅读提示:Materials and Methods: Animal experiment
BALF和血清分析
BALF收集方法(气管灌洗PBS体积)、离心条件、WBC分类计数方法、血清IgE检测试剂盒
阅读提示:Materials and Methods: BALF and serum IgE analysis
组织病理学
肺组织固定时间(1个月)、切片厚度(5 μm)、染色方法(H&E, PAS)、显微镜型号
阅读提示:Materials and Methods: Histopathological evaluation
免疫组化和免疫荧光
一抗浓度、孵育时间、抗原修复时间(40分钟)、信号放大系统、图像采集参数
阅读提示:Materials and Methods: Immunohistochemical analysis and Immunofluorescence analysis