建立OVA诱导的哮喘小鼠模型
在BALB/c小鼠中通过OVA致敏和激发建立哮喘模型,以评估Puriton的治疗效果。
40只BALB/c雌性小鼠分为5组,于第1天和第8天腹腔注射20 μg OVA和1 mg氢氧化铝溶于500 μl生理盐水,第21-25天通过雾化器吸入5% OVA激发。
Puriton attenuates the asthma severity in ovalbumin-induced murine model via balancing Th1/Th2 and inhibiting inflammation.
包含OVA诱导小鼠哮喘模型(体内)、BALF细胞计数、血清IgE检测、组织病理学、免疫组织化学、免疫荧光等多层级验证,并覆盖功能与机制验证。
BALB/c小鼠OVA诱导哮喘模型
BALB/c雌性小鼠(8只/组,共5组) OVA(20 μg)与氢氧化铝(1 mg)腹腔注射致敏,第21-25天5% OVA雾化激发 Puriton剂量:700和1400 μL/头/天,口服;地塞米松1 mg/kg/天 BALF中WBC、NE、LY计数及血清IgE水平 肺组织H&E和PAS染色评估形态学变化 免疫组化检测Th1/Th2/Th17相关细胞因子,免疫荧光检测p-NF-κB和COX-2
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
在BALB/c小鼠中通过OVA致敏和激发建立哮喘模型,以评估Puriton的治疗效果。
40只BALB/c雌性小鼠分为5组,于第1天和第8天腹腔注射20 μg OVA和1 mg氢氧化铝溶于500 μl生理盐水,第21-25天通过雾化器吸入5% OVA激发。
量化哮喘模型中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和IgE的变化,以评估免疫炎症反应。
收集BALF和血清,使用Hemavet系统进行细胞计数,使用OptEIA Mouse Kit测量IgE水平。
观察OVA诱导的肺组织形态学改变和黏液分泌,评估Puriton的保护作用。
肺组织固定、脱水、石蜡包埋,切片(5 μm)进行H&E和PAS染色,显微镜观察。
检测肺组织中Th1、Th2、Th17相关细胞因子和炎症介质PGE2的表达变化,以阐明免疫调节机制。
使用ImmPRESS Universal Polymer Kit对肺切片进行免疫组化染色,使用特异性抗体检测IFN-γ、IL-12p40、IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、IL-6和PGE2,并计数阳性细胞。
验证Puriton对NF-κB/COX-2信号通路关键蛋白活化的影响。
肺组织切片进行免疫荧光染色,使用抗p-NF-κB和抗COX-2抗体,以及荧光标记二抗,共聚焦显微镜观察。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | Puriton | Kadesh, Inc. | KP0352101 |
| 地塞米松 | SAMNAM Pharm | 02450 | |
| 卵清蛋白 | -- | -- | |
| 氢氧化铝水合物 | Sigma-Aldrich | 77161 | |
| BALF分析 | 磷酸盐缓冲液 | Walkersville | 17-516F |
| 血清IgE测定 | OptEIA Mouse Kit | BD Biosciences | 555248 |
| BALF分析 | M15R微量离心机 | Hanil Scientific | -- |
| Hemavet多物种血液学系统 | Drew Scientific | -- | |
| 血清IgE测定 | Multiskan SkyHigh设备 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 组织病理学 | 甲醛 | Daejung Chemicals & Metals | 4044-4400 |
| 石蜡 | Leica Biosystems | 39601006 | |
| 伊红 | Merck Millipore | HX57865344 | |
| 雪夫染色剂 | Merck Millipore | HX20146234 | |
| 蔡司AX10 Scope A1显微镜 | Zeiss | -- | |
| 免疫组化 | ImmPRESS通用聚合物试剂盒 | Vector Laboratories | MP-7500 |
| 抗IFN-γ抗体 | Thermo Fisher Scientific | MM700 | |
| 抗IL-12p40抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-57258 | |
| 抗IL-4抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-73318 | |
| 抗IL-5抗体 | Biolegend | 504302 | |
| 抗IL-13抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-1776 | |
| 抗TNF-α抗体 | BioVision | 3053R-100 | |
| 抗IL-6抗体 | Novus Biologicals | NBP1-77894 | |
| 抗PGE2抗体 | Bioss | bs-2639R | |
| 免疫荧光 | 抗p-NF-κB抗体 | Invitrogen | MA5-15160 |
| 抗COX-2抗体 | Invitrogen | PA1-9032 | |
| Alexa Fluor 488标记抗兔IgG | Invitrogen | A3273 | |
| Alexa Fluor 555标记抗山羊IgG | Invitrogen | A32816 | |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific | 62249 | |
| K1-Fluo共聚焦显微镜 | Nanoscope System | -- | |
| 动物实验 | Zoletil | Virbac | BN 6NGW |
| 雾化器NE-U17 | OMRON | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物分组与建模 | BALB/c雌性小鼠(8周龄?)、分组(CON, OVA, DEX, Puriton低/高剂量)、OVA致敏剂量(20 μg)和佐剂(1 mg氢氧化铝)、雾化激发浓度和时间(5% OVA,30分钟,第21-25天) 阅读提示:Materials and Methods: Animal experiment |
| 药物处理 | Puriton剂量(700和1400 μL/头/天)、给药途径(口服)、给药时间(第21-25天,每日两次)、地塞米松剂量(1 mg/kg/天) 阅读提示:Materials and Methods: Animal experiment |
| BALF和血清分析 | BALF收集方法(气管灌洗PBS体积)、离心条件、WBC分类计数方法、血清IgE检测试剂盒 阅读提示:Materials and Methods: BALF and serum IgE analysis |
| 组织病理学 | 肺组织固定时间(1个月)、切片厚度(5 μm)、染色方法(H&E, PAS)、显微镜型号 阅读提示:Materials and Methods: Histopathological evaluation |
| 免疫组化和免疫荧光 | 一抗浓度、孵育时间、抗原修复时间(40分钟)、信号放大系统、图像采集参数 阅读提示:Materials and Methods: Immunohistochemical analysis and Immunofluorescence analysis |