髓系细胞触发受体2介导M2型巨噬细胞参与肺结核感染

Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells 2 Mediates the Involvement of M2-Type Macrophages in Pulmonary Tuberculosis Infection.

作者信息Xiaoqian Shang, Naifeisha Maimaiti, Jiahui Fan, Liang Wang, Yuanyuan Wang, Hu Sun, Jie Lv, Xiufeng Zhang, Jing Wang, Xiumin Ma
PMID38562656
发布时间2024-03-27
DOI10.2147/JIR.S435216

实验完整度

包含患者样本的ELISA、qRT-PCR、HE和IHC检测,但缺乏功能验证和机制实验。

主要模型

肺结核患者外周血 肺结核病变组织

重点核对

痰涂片或培养阳性或胸片显示活动性肺结核的43例患者 ELISA检测IL-10和IL-12的血清浓度 qRT-PCR检测TREM2、IL-10、IL-12的mRNA相对表达量 IHC检测TREM2、CD68、iNOS、CD163的表达及定位 Spearman相关性分析TREM2与IL-10、IL-12的相关性

摘要

背景:巨噬细胞在结核病的发展中起重要作用。本研究旨在探讨TREM2与巨噬细胞极化及相关细胞因子之间的关系。方法:本研究纳入43例肺结核患者和37例健康对照。采用酶联免疫吸附试验检测肺结核患者外周血中M1/M2巨噬细胞相关细胞因子IL-10和IL-12的表达水平。采用实时荧光定量PCR检测TREM2、IL-10和IL-12的mRNA相对表达水平。此外,采用Spearman秩相关分析初步评估TREM2与M1/M2巨噬细胞的相关性。采用苏木精-伊红染色观察肺结核病变的病理表现。采用免疫组织化学染色观察巨噬细胞特异性分子CD68、M1特异性分子iNOS、M2特异性分子CD163及TREM2的定位。结果:肺结核患者的病变表现为朗汉斯多核巨噬细胞和结核性肉芽肿。ELISA结果显示,肺结核患者外周血中IL-10和IL-12的表达水平显著升高。此外,肺结核组TREM2、IL-10和IL-12的mRNA相对表达水平也显著升高。进一步研究发现,TREM2与M2巨噬细胞分泌的IL-10呈正相关。免疫组化显示,TREM2和巨噬细胞相关标志物在结核性肉芽肿中显著阳性。具体而言,TREM2和M2巨噬细胞标志物CD163在朗汉斯多核巨噬细胞的细胞质和细胞膜上显著表达。结论:巨噬细胞极化在肺结核中具有重要作用,需要进一步研究以了解TREM2与M2巨噬细胞之间的关系。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
TREM2在肺结核中的表达水平及其与巨噬细胞极化的关系。
核心机制
TREM2可能通过介导巨噬细胞向M2型极化,促进IL-10的分泌,从而参与肺结核的进展。
主要证据
肺结核患者外周血和病变组织中TREM2表达升高,且TREM2与M2型巨噬细胞标志物CD163和细胞因子IL-10呈正相关,而IL-10在TB组中显著升高。
研究意义
为理解结核病感染机制提供新见解和靶点,并为未来研究TREM2在M2型巨噬细胞表面的作用机制奠定基础。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

收集临床样本和基本资料

比较肺结核患者与健康对照的临床特征,确认研究对象的代表性。

纳入43例活动性肺结核患者和37例健康对照,收集外周血和病变组织,记录年龄、性别、白蛋白、C反应蛋白、白细胞等指标。

2

评估病变组织病理和炎性标志物

观察肺结核病变的病理特征并确认结核感染。

采用HE染色观察病理表现,IHC检测Ag85B的表达。

3

检测TREM2及巨噬细胞标志物表达定位

明确TREM2和M1/M2巨噬细胞标志物在病变组织中的定位及表达差异。

采用IHC检测结核病变和远端组织中TREM2、CD68、iNOS、CD163的表达和定位。

4

检测外周血细胞因子水平

比较肺结核患者和健康对照外周血中M1/M2相关细胞因子IL-10和IL-12的表达水平。

使用ELISA检测血清中IL-10和IL-12的浓度。

5

检测外周血中mRNA表达

比较肺结核患者和健康对照外周血中TREM2、IL-10、IL-12的mRNA相对表达水平。

提取外周血RNA,通过qRT-PCR检测TREM2、IL-10、IL-12的mRNA相对表达量,并采用2−ΔΔCt法计算。

6

分析TREM2与巨噬细胞极化的相关性

评估TREM2与M2型巨噬细胞相关的细胞因子IL-10和M1型相关的IL-12之间的相关性。

使用Spearman相关分析评估TREM2与IL-10、IL-12的mRNA表达的相关性。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
Ag85B抗体Biossbs-6460R
TREM2抗体Biossbs-2723R
CD68抗体Abcamab955
iNOS抗体Biossbs-0162R
CD163抗体Biossbs-2527R
IL-10 ELISA试剂盒Shanghai Jiang Lai Biotechnology Co., Ltd.JL19246
IL-12 ELISA试剂盒Shanghai Jiang Lai Biotechnology Co., Ltd.JL18332
TransZol Up Plus RNA试剂盒----
cDNA合成试剂盒TakaraRR037
PCR试剂盒TakaraRR820
Image-Pro Plus--8.0.1
GraphPad Prism--8.0.1
SPSS--26.0

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
临床样本收集
纳入标准:肺结核诊断符合WS288-2017;排除其他免疫疾病、肿瘤、肺部感染和HIV感染。
阅读提示:Methods, Research Objects
HE染色
染色时间:苏木精1分钟,伊红3分钟,1%盐酸乙醇1秒,PBS返蓝。
阅读提示:Methods, HE Staining
IHC染色
抗体浓度:TREM2 1:200,CD68 1:2000,iNOS 1:300,CD163 1:100;抗原修复时间15分钟;一抗孵育4°C 14小时;二抗37°C 90分钟;DAB显色2.5分钟±10秒。
阅读提示:Methods, IHC Staining; Table 1
ELISA
试剂盒品牌及货号:IL-10(JL19246),IL-12(JL18332);按说明书操作,标准曲线采用四参数logistic函数。
阅读提示:Methods, Elisa
qRT-PCR
RNA浓度>80ng/μL,纯度OD260/OD280=1.8–2.0;cDNA合成试剂盒Takara RR037;PCR试剂盒Takara RR820;反应条件:预变性95°C 30s,40个循环95°C 5s和60°C 34s。
阅读提示:Methods, qRT-PCR
统计分析
正态分布数据用t检验,非正态用Wilcoxon检验,计数资料用卡方检验,相关性用Pearson或Spearman相关分析;P<0.05为显著。
阅读提示:Methods, Statistical Analysis