临床样本收集与分组
比较AGA、AHU与健康对照的临床和生化特征。
收集90名男性参与者(30例AGA、30例AHU、30例HC)的临床资料和血液样本,进行血常规、生化指标检测。
The impact of AIM2 inflammasome-induced pyroptosis on acute gouty arthritis and asymptomatic hyperuricemia patients.
研究包含临床队列样本(AGA、AHU、HC)的分子表达检测(qRT-PCR、Western blot、ELISA)及血清dsDNA定量,但以相关性分析为主,缺乏功能验证和动物模型。
急性痛风性关节炎(AGA)患者外周血单核细胞(PBMC) 无症状高尿酸血症(AHU)个体外周血单核细胞(PBMC) 健康对照(HC)外周血单核细胞(PBMC)
样本分组:AGA组30例、AHU组30例、HC组30例,男性,年龄18-70岁 血清dsDNA定量:使用Quant-iT PicoGreen dsDNA试剂盒(Invitrogen) mRNA检测:RT-qPCR检测AIM2、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18,以GAPDH为内参,2-ΔΔCT法分析 蛋白检测:Western blot检测AIM2、Caspase-1等,使用BCA法测定蛋白浓度 血清细胞因子:ELISA检测IL-1β和IL-18,重复样本分析
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
比较AGA、AHU与健康对照的临床和生化特征。
收集90名男性参与者(30例AGA、30例AHU、30例HC)的临床资料和血液样本,进行血常规、生化指标检测。
评估各组血清dsDNA水平是否不同。
使用Quant-iT PicoGreen dsDNA试剂盒进行荧光定量检测血清dsDNA浓度。
比较各组PBMCs中AIM2、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18的mRNA水平。
提取全血总RNA,逆转录cDNA,进行实时PCR扩增,以GAPDH为内参,用2-ΔΔCT法分析表达水平。
比较各组PBMCs中AIM2、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18的蛋白水平。
提取PBMCs总蛋白,BCA法测定浓度,SDS-PAGE电泳,转膜,抗体孵育,ECL显色,Image J分析条带强度。
比较各组血清IL-1β和IL-18浓度。
使用ELISA试剂盒检测血清IL-1β和IL-18浓度,于450 nm处读取OD值。
评估dsDNA水平与临床指标、AIM2蛋白与炎性小体组分及炎症因子的相关性。
对dsDNA水平与BMI、TG、UA等指标进行Spearman相关分析;对AIM2蛋白与Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白进行相关分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| dsDNA定量 | Quant-iT PicoGreen dsDNA试剂盒 | Invitrogen | -- |
| BioTek Synergy2多功能酶标仪 | BioTek | -- | |
| RNA提取 | 全血总RNA提取试剂盒 | IVDSHOW | -- |
| RT-PCR | 逆转录试剂盒 | TaKaRa | -- |
| Applied Biosystems 7500实时荧光定量PCR系统 | Applied Biosystems | -- | |
| Western blot | BCA蛋白定量试剂盒 | Absin | abs9232 |
| SDS-PAGE凝胶 | Epizyme Scientific | PG112 | |
| SDS-PAGE凝胶 | Epizyme Scientific | PG113 | |
| AIM2抗体 | Absin | abs125828 | |
| Caspase-1抗体 | Cell Signaling Technology | 3866 | |
| GSDMD抗体 | Bioss | P57764 | |
| IL-1β抗体 | Cell Signaling Technology | 12703 | |
| IL-18抗体 | Cell Signaling Technology | 54943 | |
| GAPDH抗体 | Servicebio | GB15004 | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG抗体 | Servicebio | GB23303 | |
| ECL化学发光试剂盒 | Absin | abs920 | |
| GE AI 680超灵敏多功能成像系统 | GE | -- | |
| ELISA | 人IL-18 ELISA试剂盒 | Meimian | 0139H1 |
| 人IL-1β ELISA试剂盒 | Meimian | 0181H1 | |
| Rayto RT-6100酶标仪 | Rayto | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本收集与分组 | 样本来源:北部战区总医院门诊;AGA诊断基于2015年ACR/EULAR标准;AHU基于高尿酸血症标准;HC为体检者;年龄性别匹配;排除标准;样本量:每组30例。 阅读提示:见Materials and Methods中Participants and samples部分 |
| 血清dsDNA检测 | 试剂盒:Quant-iT PicoGreen dsDNA Kit;血清体积;PicoGreen稀释倍数;孵育时间;激发/发射波长;酶标仪型号。 阅读提示:见Materials and Methods中Fluorescent quantification部分 |
| mRNA表达检测 | RNA提取试剂盒;逆转录试剂盒;引物序列;内参基因GAPDH;RT-PCR系统;热循环条件;数据分析方法(2-ΔΔCT)。 阅读提示:见Materials and Methods中Total RNA isolation and real-time PCR analysis部分 |
| 蛋白表达检测 | 蛋白提取方法;BCA试剂盒;SDS-PAGE凝胶浓度;一抗信息(克隆号、稀释比);二抗信息;ECL试剂盒;成像系统。 阅读提示:见Materials and Methods中Western blotting部分及Figure 3关注n值 |
| 血清细胞因子检测 | ELISA试剂盒货号;样本重复数;OD值读取波长;酶标仪型号。 阅读提示:见Materials and Methods中ELISA部分 |
| 统计分析 | 统计软件版本;正态性检验方法;t检验、Mann-Whitney U检验、单因素方差分析的使用条件;Spearman相关性分析;显著性水平P<0.05。 阅读提示:见Materials and Methods中Statistical analysis部分 |