建立下肢缺血再灌注模型
模拟下肢缺血再灌注损伤,为评估干预措施提供模型。
大鼠麻醉后行中线剖腹术,用微血管夹夹闭腹主动脉120分钟,恢复灌注120分钟。
Effect of fullerenol C60 on lung and renal tissue in lower extremity ischemia‑reperfusion injury in sevoflurane‑treated rats.
包含体外动物模型(大鼠下肢IR模型)、组织病理学、免疫组化和生化检测,但缺少分子机制验证(如Western blot)和多层证据。
Wistar白化大鼠下肢缺血再灌注模型 肺组织 肾组织
大鼠品系:Wistar白化雄性大鼠,8月龄,体重225-275g 分组:Sham、IR、IR-FUL、IR-SEVO、IR-FUL-SEVO,每组6只 下肢IR诱导:腹主动脉夹闭120分钟,再灌注120分钟 富勒醇C60给药:100 mg/kg腹腔注射,缺血前30分钟 七氟醚给药:2.3%吸入浓度,4 L/min,100% O2,4小时
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟下肢缺血再灌注损伤,为评估干预措施提供模型。
大鼠麻醉后行中线剖腹术,用微血管夹夹闭腹主动脉120分钟,恢复灌注120分钟。
评估富勒醇C60和七氟醚单独或联合对IR损伤的影响。
IR-FUL组在缺血前30分钟腹腔注射富勒醇C60;IR-SEVO组在IR期间吸入七氟醚;IR-FUL-SEVO组同时给予富勒醇C60和七氟醚。
评估肺和肾组织的组织病理学损伤程度。
肺和肾组织经固定、包埋、切片,进行H&E染色,肾组织另做PAS染色,光镜下观察并评分。
检测炎症和凋亡相关蛋白的表达变化。
肺和肾组织切片用TNF-α、IL-1β、ICAM-1抗体染色;肾组织另用BAX、BCL-2、CASP-3抗体染色,评估免疫阳性面积。
评估肾小管上皮细胞凋亡情况。
肾组织切片进行TUNEL染色,计数TUNEL阳性细胞数。
评估氧化应激状态。
肺和肾组织匀浆,检测TBARS水平、CAT和GST活性,以评估脂质过氧化和抗氧化酶活性。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 麻醉 | Rompun | -- | -- |
| 抗凝 | 肝素钠 | -- | -- |
| 药物处理 | 富勒醇C60 | MilliporeSigma | 99685-96-8 |
| 麻醉 | 七氟醚 | -- | -- |
| 生化分析 | Heidolph匀浆器DIAX 900 | Heidolph Instruments GMBH & CO. KG | -- |
| 牛血清白蛋白 | MilliporeSigma | -- | |
| 组织处理 | 10%中性缓冲福尔马林 | -- | -- |
| 组织切片 | Leica RM2245旋转切片机 | Leica Microsystems GmbH | -- |
| 染色 | 伊红 | -- | -- |
| 免疫组化 | Ultra V Block溶液 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | TA-125-UB |
| 抗TNF-α抗体 | Elabscience Biotechnology, Inc. | E-AB-33121 | |
| 抗IL-1β抗体 | Elabscience Biotechnology, Inc. | E-AB-66749 | |
| 抗ICAM-1抗体 | BIOSS | bs-0608R | |
| 抗BAX抗体 | BIOSS | bs-0127R | |
| 抗BCL-2抗体 | BIOSS | bs-4563R | |
| 抗CASP-3抗体 | Elabscience Biotechnology, Inc. | E-AB-66940 | |
| 生物素化二抗 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | TP-125-BN | |
| HRP标记链霉亲和素 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | TS-125-HR | |
| DAB显色剂 | -- | -- | |
| 显微镜检查 | Leica DM4000 B光学显微镜 | Leica Microsystems GmbH | -- |
| 图像分析 | ImageJ软件 | National Institutes of Health | -- |
| TUNEL检测 | TUNEL检测试剂盒 | Elabscience Biotechnology, Inc. | E-CK-A331-50T |
| 封片 | Entellan new封片剂 | MilliporeSigma | 107961 |
| 统计分析 | SPSS | IBM Corp. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型和分组 | 大鼠品系、年龄、体重、性别;每组样本量;分组方式(Sham、IR、IR-FUL、IR-SEVO、IR-FUL-SEVO) 阅读提示:Materials and methods: Animals and experimental protocol |
| IR诱导 | 夹闭位置(腹主动脉)、夹闭时间(120分钟)、再灌注时间(120分钟)、肝素剂量(500 IU/kg)和给药途径(尾静脉) 阅读提示:Materials and methods: Animals and experimental protocol |
| 药物处理 | 富勒醇C60剂量(100 mg/kg)、给药途径(腹腔)、给药时间(缺血前30分钟);七氟醚浓度(2.3%)、流量(4 L/min)、氧气浓度(100%)、持续时间(4小时) 阅读提示:Materials and methods: Animals and experimental protocol |
| 组织病理学评估 | 固定液及时间(10%中性福尔马林,72小时)、切片厚度(4 µm)、染色方法(H&E、PAS)、评分标准(肺:ATS标准;肾:半定量评分0-5) 阅读提示:Materials and methods: Histopathological assessment |
| 免疫组化 | 抗原修复(柠檬酸盐缓冲液pH 6.0,85°C,2小时)、一抗稀释度及来源、二抗和链霉亲和素孵育时间、DAB显色 阅读提示:Materials and methods: Immunohistochemical assessment |
| TUNEL检测 | TUNEL试剂盒型号(E-CK-A331-50T)、染色步骤(按厂家方案)、封片剂(Entellan new)、计数方法(10个随机视野,×400) 阅读提示:Materials and methods: TUNEL assay for kidney samples |
| 生化检测 | 组织匀浆条件(Heidolph匀浆器,1000 U,3分钟)、离心条件(10,000×g,10分钟,4°C)、TBARS、CAT、GST检测方法、蛋白质定量(Lowry法) 阅读提示:Materials and methods: Biochemical analysis |