临床样本分析
评估胃癌组织中galectin-1表达与腹膜胶原沉积的关系及其与临床分期的关联
对36例胃癌患者的原发肿瘤和配对腹膜组织进行HE、IHC和Masson三色染色,分析galectin-1表达水平和胶原沉积厚度,并进行相关性分析。
Galectin-1 promotes gastric cancer peritoneal metastasis through peritoneal fibrosis.
包含患者组织样本分析、体外细胞实验(HPMCs共培养、粘附实验)和体内动物模型验证,并进行了功能验证(过表达LGALS1)和机制相关的胶原表达检测,证据层级较为完整。
HMrSV5人腹膜间皮细胞(HPMCs) HGC-27和SGC-7901胃癌细胞系 BALB/c裸鼠腹腔转移模型
患者GC组织及配对腹膜组织的临床分期(I-II期、III期、IV期) LGALS1过表达慢病毒转染及稳定细胞系构建(嘌呤霉素筛选) HPMCs条件培养基处理72小时 GC细胞粘附实验(calcein-AM染色,3小时孵育) 动物模型中SGC-7901细胞腹腔注射(1.2×10^7细胞/只),56天后分析
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估胃癌组织中galectin-1表达与腹膜胶原沉积的关系及其与临床分期的关联
对36例胃癌患者的原发肿瘤和配对腹膜组织进行HE、IHC和Masson三色染色,分析galectin-1表达水平和胶原沉积厚度,并进行相关性分析。
验证LGALS1是否促进腹膜间皮细胞中胶原表达及GC细胞粘附
构建LGALS1过表达的GC细胞系(HGC-27和SGC-7901),收集条件培养基处理HMrSV5细胞72小时,通过qRT-PCR和western blot检测胶原I、胶原III和FN1表达,并进行细胞粘附实验。
验证LGALS1过表达是否通过促进腹膜胶原沉积而促进GC腹膜转移
将LGALS1过表达、阴性对照和野生型SGC-7901细胞腹腔注射到BALB/c裸鼠,56天后分析腹膜转移结节数、胶原沉积及胶原蛋白表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组织化学 | 抗galectin-1抗体(ab138513) | Abcam | ab138513 |
| 抗GAPDH抗体(ab9485) | Abcam | ab9485 | |
| 抗胶原I抗体(bs-0578R) | Bioss | bs-0578R | |
| 抗胶原III抗体(bs-0549R) | Bioss | bs-0549R | |
| 抗FN1抗体(bs-13455R) | Bioss | bs-13455R | |
| 山羊抗兔IgG (sc-2357) | Santa Cruz Biotechnology | sc-2357 | |
| Western blot | HRP标记的山羊抗小鼠IgG (sc-516102) | Santa Cruz Biotechnology | sc-516102 |
| 细胞活力检测 | MTT检测试剂盒 | Sigma-Aldrich | -- |
| 细胞培养 | 二甲基亚砜 | Sigma-Aldrich | -- |
| 组织染色 | 改良Masson三色染色试剂盒 (G1346) | Beijing Solarbio Science & Technology Co. Ltd. | G1346 |
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| RPMI 1640培养基 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 胎牛血清 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 青霉素-链霉素 | Gibco | -- | |
| 慢病毒转导 | 聚凝胺 | Sigma-Aldrich | -- |
| 嘌呤霉素 | Sigma-Aldrich | -- | |
| RNA提取 | RNeasy Mini Kit | Invitrogen | -- |
| cDNA合成 | 逆转录试剂盒 | Takara | -- |
| 实时荧光定量PCR | SYBR Green荧光染料 | Roche Diagnostics | -- |
| 蛋白免疫印迹 | 硝酸纤维素膜 | GE Healthcare Life Sciences | -- |
| West Pico化学发光底物 | Pierce | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 临床样本分析 | 患者胃癌及配对腹膜组织的临床分期(I-II、III、IV期) 阅读提示:见Methods中“Tissue samples”和“Histological examination and immunohistochemistry evaluation” |
| 体外细胞实验 | HPMCs条件培养基处理时间(72小时) 阅读提示:见Methods中“Cell line and culture”和“LGALS1 promotes collagen expression in peritoneal mesothelial cells” |
| 细胞粘附实验 | GC细胞与HPMCs共培养时间(3小时) 阅读提示:见Methods中“Tumor cell adhesion assay” |
| 动物实验 | SGC-7901细胞腹腔注射数量(1.2×10^7)及观察时间(56天) 阅读提示:见Methods中“Animal assays” |