建立慢性失眠模型
利用不稳定平台引起睡眠碎片化,建立慢性失眠大鼠模型。
将大鼠随机分为对照组和模型组,每组12只。模型组饲养在含多串不稳定平台的笼中,平台周围有浅水(1.5cm深),持续6周(每周第一天除外)。
Establishment of a chronic insomnia rat model of sleep fragmentation using unstable platforms surrounded by water.
实验包括动物模型建立、行为学测试(Morris水迷宫、戊巴比妥诱导睡眠)、睡眠监测(EEG/EMG)、分子检测(ELISA、免疫组化、免疫荧光),但缺乏独立的功能验证或机制验证,且样本量小。
雄性Sprague-Dawley大鼠(慢性失眠模型)
睡眠碎片化诱导装置:多串不稳定平台,周围环绕1.5cm深浅水 模型持续时间:6周(除每周第一天外) 戊巴比妥钠剂量:35 mg/kg 腹腔注射 睡眠监测时间:第46天,6:00至18:00和18:00至次6:00 样本量:每组12只(行为学),每组6只(睡眠监测)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
利用不稳定平台引起睡眠碎片化,建立慢性失眠大鼠模型。
将大鼠随机分为对照组和模型组,每组12只。模型组饲养在含多串不稳定平台的笼中,平台周围有浅水(1.5cm深),持续6周(每周第一天除外)。
监测模型大鼠的体重、食物和饮水摄入变化。
每周第一天测量体重和食物/水摄入量,分别在6:00和18:00以及次日6:00进行,评估白天和夜间的变化。
通过Morris水迷宫测试评估模型大鼠的学习和记忆能力。
在第37-41天的晚上进行Morris水迷宫训练和测试,记录逃避潜伏期和穿越目标区域的次数。
评估模型大鼠对催眠药物的反应,验证模型大鼠的睡眠障碍。
在第43天,腹腔注射35 mg/kg戊巴比妥钠,记录睡眠潜伏期和睡眠时间。
通过多导睡眠图监测评估模型大鼠的睡眠结构和觉醒情况。
在第44天,随机选择每组6只大鼠,在麻醉下用立体定位仪固定2EEG/1 EMG头套,第46天连接放大器监测睡眠,从6:00至18:00和18:00至次日6:00,并辅以红外监测。
检测血清和脑组织中炎症因子和食欲素A及orexin 1r的表达,探索睡眠碎片化的分子机制。
在第44天上午,对每组其余6只非睡眠监测大鼠麻醉后采集腹主动脉血,随后处死取脑。血液离心获取血清,脑组织固定后切片,进行ELISA、免疫组化和免疫荧光检测。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| ELISA | IL-1β ELISA试剂盒 | Sigma-Aldrich (Merck KGaA) | RAB0277 |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Sigma-Aldrich (Merck KGaA) | RAB0311 | |
| TNF-α ELISA试剂盒 | Sigma-Aldrich (Merck KGaA) | RAB0479 | |
| IL-10 ELISA试剂盒 | Abcam | ab214566 | |
| Orexin A ELISA试剂盒 | Sinobestbio | YX-E28754 | |
| 免疫组化 | IL-1β抗体 | BIOSS | bs-0812R |
| IL-6抗体 | BIOSS | bs-4539R | |
| 免疫荧光 | Orexin A抗体 | BIOSS | bs-15509R |
| Orexin 1r抗体 | BIOSS | bs-18029R | |
| 免疫组化/免疫荧光 | 二抗试剂盒 | BIOSS | SP-2003 |
| 免疫荧光 | 辣根过氧化物酶-IgG | Recordbio | RCA015 |
| TYR-CY3染料 | Recordbio | RCA019 | |
| TCR-488染料 | Recordbio | RCF020 | |
| 抗荧光衰减封片剂 | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | s2100 | |
| 免疫组化 | 中性树胶 | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | G8590 |
| DAB显色液 | Origene Technologies, Inc. | ZLI-9018 | |
| 仪器 | Morris水迷宫设备 | Chengdu Taimeng Science and Technology Co., Ltd. | WMT-100 |
| 低速冷冻离心机 | Zonkia Scientific Instruments Co., Ltd. | KDC-2044 | |
| 超速离心机 | Eppendorf | Himac | |
| 荧光显微镜 | Leica Microsystems, Inc. | DMi8 | |
| 酶标仪 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | Multiskan™ | |
| 立体定位仪 | 数字脑立体定位仪公司 | -- | |
| 睡眠监测 | 睡眠监测仪器(2脑电/1肌电头套) | Pinnacle Technology, Inc. | -- |
| 红外监控器 | TP-Link Technologies Co., Ltd. | -- | |
| 数据分析 | Image-Pro Plus 6.0软件 | Media Cybernetics, Inc. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物与饲养 | 雄性SD大鼠,8-9周龄,体重200-240g;每笼3只;光照周期12h/12h;温度23±2℃;湿度40-60% 阅读提示:详见Materials and methods中的Animals部分 |
| 模型建立 | 平台规格:直径5cm,高3cm,不锈钢丝直径3mm;浅水深度1.5cm;模型持续6周(每周第一天除外) 阅读提示:详见Materials and methods中的Animal grouping and modeling部分 |
| 行为学测试 | Morris水迷宫训练和测试在第37-41天晚上进行;戊巴比妥钠剂量35mg/kg腹腔注射,在第43天进行 阅读提示:详见Materials and methods中的Learning and memory function assessment及Pentobarbital sodium-induced sleep experiment部分 |
| 睡眠监测 | 每组6只大鼠;使用2EEG/1EMG头套;在第44天植入,第46天监测;监测时间6:00-18:00和18:00-次日6:00 阅读提示:详见Materials and methods中的Sleep monitoring部分 |
| 分子检测 | 血清采集:腹主动脉采血,离心3000g 15min;脑组织固定于4%多聚甲醛3天;ELISA、免疫组化、免疫荧光检测炎症因子和orexin A/orexin 1r 阅读提示:详见Materials and methods中的Sample collection、ELISA、Immunohistochemical detection及Immunofluorescence detection部分 |