游离脂肪酸通过抑制AMPK/KLF2/eNOS信号通路诱导冠状动脉微血管功能障碍

血清游离脂肪酸（FFAs）水平升高与微血管功能障碍密切相关。在我们之前的研究中，通过脂质输注增加小鼠血清FFAs水平，成功建立了冠状动脉微血管功能障碍（CMD）模型。然而，其潜在机制仍知之甚少。因此，本研究旨在探讨FFA诱导CMD的机制。通过脂质联合肝素输注6小时建立CMD小鼠模型，以增加血清FFAs浓度。模型建立后，评估小鼠的冠状动脉血流储备（CFR）、白细胞活化程度和心脏微血管结构。用不同浓度的棕榈酸处理心脏微血管内皮细胞（CMECs），并评估细胞活力。通过免疫组化和蛋白质印迹分析检测AMP活化蛋白激酶（AMPK）、Krüppel样因子2（KLF2）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达水平的变化。随后设计使用AMPK激活剂、KLF2过表达质粒、小干扰RNA和尼可地尔的实验，以研究AMPK/KLF2/eNOS信号通路的潜在参与。这些实验表明，FFAs可诱导小鼠CMD，其特征是与对照小鼠相比，CFR降低（1.89±0.37对2.74±0.30）和白细胞粘附增加（4,350±1,057.5对11.8±5.4 cells/mm2）。与对照小鼠相比，CMD模型小鼠中CD11b表达和细胞内活性氧（ROS）水平升高。模型组血清TNF-α和IL-6水平高于对照组。透射电子显微镜显示，模型小鼠心脏组织中的CMECs严重肿胀。此外，棕榈酸以剂量依赖性方式降低CMEC活力并增加ROS产生。值得注意的是，AMPK/KLF2/eNOS信号通路在体内和体外均被FFAs抑制。用AMPK激活剂、KLF2过表达质粒或尼可地尔激活该轴可恢复CMD模型小鼠的CFR，抑制氧化应激并增加CMEC活力。总之，本研究结果表明，FFAs可通过抑制AMPK/KLF2/eNOS信号通路诱导CMD，而激活该通路可减轻FFA诱导的CMD，这可能是CMD的一种治疗选择。