表观遗传药物联合治疗通过上调胶质瘤中MAGE-D4的表达增强MAGE-D4肽特异性T细胞的抗肿瘤活性

目的：本研究评估了表观遗传药物地西他滨（DAC）、丙戊酸（VPA）和曲古抑菌素A（TSA）联合治疗对胶质瘤免疫治疗的疗效。方法：通过在线分析MAGE-D4在胶质瘤中的表达及预后，并通过qRT-PCR、Western blot和流式细胞术检测表观遗传药物诱导的胶质瘤中MAGE-D4和HLA-A2的表达。通过焦磷酸测序确定MAGE-D4启动子的甲基化状态。预测并合成了HLA-A2限制性MAGE-D4肽。进行亲和力测定和肽/HLA复合物稳定性测定以确定肽与HLA之间的亲和力。采用CCK8实验、CFSE实验、ELISA和ELISPOT检测MAGE-D4肽特异性T细胞的功能。采用流式细胞术、ELISA和细胞毒性试验检测MAGE-D4肽特异性T细胞联合表观遗传药物对胶质瘤的体外细胞毒性作用。最后，应用荷瘤小鼠模型检测特异性T细胞对体内胶质瘤的抑制作用。结果：MAGE-D4在胶质瘤中高表达，并与不良预后相关。表观遗传药物可诱导胶质瘤细胞表达MAGE-D4和HLA-A2。发现MAGE-D4相关肽可诱导树突状细胞刺激最高的T细胞增殖、IL-2分泌和IFN-γ分泌活性。仅经TSA或TSA联合DAC处理的MAGE-D4肽特异性T细胞具有最强的细胞毒性作用，且HLA阻断后其对胶质瘤细胞的细胞毒性作用显著降低。体内实验也证实MAGE-D4特异性T细胞抑制TSA处理的胶质瘤。结论：MAGE-D4在胶质瘤中高表达，并与胶质瘤的预后相关。所鉴定的新型MAGE-D4肽能够诱导MAGE-D4特异性T细胞，有效抑制胶质瘤生长，而表观遗传药物的应用可以增强这种抑制作用。