组织样本收集与病理分型
获取犬乳腺肿瘤及癌旁正常组织,并通过组织病理学确认肿瘤类型。
收集6只犬的乳腺肿瘤组织,其中3例浸润癌、3例导管癌,经HE染色进行病理分型。
Expression of tumour transcription factor GLI1 in canine mammary tumours tissue.
该研究包含蛋白表达检测(Western blot)和定位(免疫组化、免疫荧光)两个层面,但缺乏功能实验或动物模型验证,证据层级有限。
犬乳腺浸润癌组织 犬乳腺导管癌组织 犬癌旁正常乳腺组织
样本类型:犬乳腺浸润癌、导管癌和癌旁正常组织,各3例 检测方法:Western blot、免疫组织化学、免疫荧光 抗体稀释度:GLI1 (1:400),Bmi1 (1:500),Sox2 (1:500) 数据分析:使用Image-Pro Plus 6.0进行光密度分析,SPSS 21.0进行t检验和LSD多重比较
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取犬乳腺肿瘤及癌旁正常组织,并通过组织病理学确认肿瘤类型。
收集6只犬的乳腺肿瘤组织,其中3例浸润癌、3例导管癌,经HE染色进行病理分型。
定量分析GLI1/Bmi1/Sox2在癌组织与癌旁组织中的表达差异。
提取组织蛋白,SDS-PAGE电泳,转膜后与特异性抗体孵育,ECL显色,以GAPDH为内参进行灰度分析。
评估GLI1/Bmi1/Sox2在组织中的阳性表达和亚细胞定位。
石蜡切片经抗原修复、封闭后,与一抗孵育,二抗标记,DAB显色,苏木素复染。
进一步验证蛋白的亚细胞分布,特别是细胞质和细胞核。
使用荧光标记的二抗孵育,DAPI染核,荧光显微镜观察。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| Western blot | PVDF膜 | Millipore Corporation | -- |
| GLI1抗体 | Bioss | bs-1206R | |
| Bmi1抗体 | Bioss | bs-2999R | |
| Sox2抗体 | Bioss | bs-0523R | |
| ECL试剂盒 | NCM Biotechnology | -- | |
| 免疫组化 | GLI1抗体 | Abcam | 1:300 |
| Bmi1抗体 | Abcam | 1:300 | |
| Sox2抗体 | Abcam | 1:300 | |
| 山羊抗小鼠IgG (H+L)/HRP | Bioss | bs-40296 | |
| 山羊抗兔IgG (H+L)/HRP | Bioss | bs-40295G | |
| 免疫荧光 | 山羊抗小鼠IgG (H+L) IRDye8 | Bioss | bs-40296G-IRDye8 |
| 山羊抗兔IgG (H+L) IRDye8 | Bioss | bs-40295G-IRDye8 | |
| 免疫组化 | DAB显色液 | -- | -- |
| Western blot | RIPA裂解液 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本收集 | 样本来源、肿瘤类型(浸润癌、导管癌)和数量(各3例) 阅读提示:见Materials and Methods 2.1 |
| Western blot | 蛋白提取方法、抗体稀释度、内参及显色方法 阅读提示:见Materials and Methods 2.2 |
| 免疫组化 | 一抗稀释度、二抗稀释度、DAB显色 阅读提示:见Materials and Methods 2.3 |
| 免疫荧光 | 荧光二抗稀释度 阅读提示:见Materials and Methods 2.4 |