从健康和哮喘马支气管肺泡灌洗液中分离细胞外囊泡

细胞外囊泡（EVs）是膜结合颗粒，通过介导细胞间相互作用参与炎症反应。此前，已从人类和啮齿动物的支气管肺泡灌洗液（BALF）中分离出EVs。本研究旨在调查哮喘马（EA，n=35）和健康马（n=19）BALF中EVs的数量和大小分布。在支气管镜检查期间向右肺注入盐水，然后手动抽吸。回收的BALF离心两次以去除细胞和生物碎片。上清液浓缩，并使用尺寸排阻色谱法分离EVs。使用纳米颗粒跟踪分析（NTA）测量样品组分的颗粒数量和大小，并使用透射电子显微镜和共聚焦激光扫描显微镜观察EVs。所描述的方法能够分离和保存EVs。通过NTA，EA马中EV的平均大小为247±35 nm（SD），对照组为261±47 nm。EA马中EV的平均浓度为1.38×10^12±1.42×10^12颗粒/mL，对照组为1.33×10^12±1.07×10^12颗粒/mL，两组之间无统计学显著差异。通过Western印迹和显微镜检查，这些颗粒被证明与EV蛋白标志物（CD63、TSG101、HSP70、EMMPRIN和肌动蛋白）和透明质酸相关。马BALF富含各种大小的EVs，所描述的方案可用于分离EVs。将来，可以研究EVs在气道炎症马中的作用。