建立DCD猪模型
模拟临床心脏死亡后器官捐献条件
54只BAMA小型猪随机分为5组，通过夹闭气管致心脏骤停，建立热缺血30分钟的DCD模型。
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SP600125和低温机械灌注对猪心脏死亡后捐献同种异体肝移植的影响
Effects of SP600125 and hypothermic machine perfusion on livers donated after cardiac death in a pig allograft transplantation model.
实验完整度
高包含体外细胞模型、动物模型、患者样本或组学数据中的至少两个独立证据层级，并包含功能验证或机制验证。
主要模型
BAMA小型猪DCD肝移植模型 猪原代肝细胞（经Western blot等检测）
重点核对
供体猪品系：BAMA小型猪 随机分组：5组，每组n=6或12 SP600125浓度：20 µM 灌注方式：CS 2 h + HMP 2 h 检测时间点：术后1、2、3、4、5天
摘要
背景：低温机械灌注（HMP）可改善动物模型和临床实践中供肝移植的质量。SP600125是c-Jun N末端激酶（JNK）的抑制剂，可抑制JNK信号通路以减轻供肝缺血再灌注损伤（IRI）。我们进行本研究旨在探讨HMP与SP600125联合应用对猪心脏死亡后捐献（DCD）肝移植物活力的保护作用。方法：将54只成年BAMA小型猪随机分为5组，包括假手术组、冷保存4小时（CS 4 h）组、CS 4 h + SP600125组、CS 2 h + HMP 2 h组和CS 2 h + HMP 2 h + SP600125组。CS 4 h和CS 4 h + SP600125组的供肝常规冷保存4小时，而CS 2 h + HMP 2 h和CS 2 h + HMP 2 h + SP600125组的供肝冷保存2小时，然后进行HMP处理2小时。保存和灌注液中含SP600125（20 µM）。肝移植后随访5天，通过血清学检查、病理结果和存活率比较手术结果。结果：CS 2 h + HMP 2 h + SP600125组肝移植后效果最佳，随访5天内供肝损伤最小。此外，血清学检查、病理结果和存活率均显示CS 2 h + HMP 2 h ± SP600125组优于CS 4 h ± SP600125组。结论：HMP联合SP600125具有保肝作用，提高心脏死亡后采集的猪肝脏的质量和活力，从而改善肝移植后的预后。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 探索HMP联合SP600125对猪DCD肝移植后移植物活力的保护作用及其机制。
- 核心机制
- SP600125通过抑制JNK磷酸化，减少凋亡相关蛋白表达，抑制肝细胞凋亡，从而减轻缺血再灌注损伤。
- 主要证据
- CS 2 h + HMP 2 h + SP600125组在血清学指标（ALT、AST、TBIL）、病理评分、TUNEL凋亡检测及存活率方面均优于CS 4 h组，且P-JNK表达显著降低。
- 研究意义
- 该研究为临床应用HMP联合SP600125改善DCD供肝质量提供了理论基础，但尚需进一步毒性及剂量研究。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
供肝冷保存和低温机械灌注
比较不同保存方式对供肝质量的影响
CS组冷保存4小时；HMP组冷保存2小时后再进行2小时低温机械灌注；部分组在保存/灌注液中加入SP600125。
原位肝移植
建立猪同种异体肝移植模型以评估移植物功能
进行经典原位肝移植，无静脉转流，术后不使用免疫抑制剂。
术后评估
检测移植后肝功能和组织损伤
术后5天内定期采集血样检测血清学指标，通过HE染色和TUNEL染色评估组织病理和凋亡，Western blot检测蛋白表达，并记录存活率。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | BAMA小型猪 | -- | -- |
| 灌注保存 | LPS-1溶液 | Organ Recovery Systems Inc. | -- |
| 低温机械灌注 | Lifeport肝脏转运器 | Organ Recovery Systems Inc. | -- |
| 灌注液添加剂 | SP600125 | -- | C14H8N2O |
| 生化分析 | Vitros 5600自动化生化免疫分析仪 | Johnson & Johnson | -- |
| 凝血分析 | 自动凝血分析仪（斯塔戈） | Stago | -- |
| 乳酸分析 | GEM 3500血液电解质分析仪 | -- | -- |
| Western blot | ChemiDoc™ XRS | Bio-Rad | -- |
| TUNEL检测 | TUNEL检测试剂盒 | Beyotime | -- |
| Western blot | Anti-JNK1/2/3抗体 | Bioss | bs-2592R |
| Anti-phospho-JNK1/2/3抗体 | Bioss | bs-1640R | |
| Anti-Bcl-2抗体 | Abcam | ab117115 | |
| Anti-Bax抗体 | Bioss | bs-0127R | |
| Anti-Cleaved Caspase-3抗体 | Abcam | ab49822 | |
| Anti-Cytochrome C抗体 | Abcam | ab90529 | |
| Anti-GAPDH抗体 | Abcam | ab8245 | |
| 灌注液 | KPS-1 | Organ Recovery Systems Inc. | -- |
| 灌注液添加剂 | α-酮戊二酸 | -- | -- |
| N-乙酰半胱氨酸 | -- | -- | |
| L-精氨酸 | -- | -- | |
| 硝酸甘油 | -- | -- | |
| 前列地尔 | -- | -- | |
| 术中用药 | 甲泼尼龙 | -- | -- |
| 葡萄糖酸钙 | -- | -- | |
| 碳酸氢钠 | -- | -- | |
| 麻醉 | 丙泊酚 | -- | -- |
| 顺阿曲库铵 | -- | -- | |
| 异氟烷 | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 供体猪品系、年龄、体重；热缺血时间；随机分组方法 阅读提示：见Methods: Experimental animals 和 Experimental design |
| 器官保存 | 冷保存时间、HMP时间、灌注液成分、SP600125浓度 阅读提示：见Methods: Collection and preparation of donor livers 和 HMP |
| 肝移植手术 | 受体猪处理、手术方式、麻醉用药、术中补液及血管活性药物 阅读提示：见Methods: Recipient liver transplantation model |
| 术后评估 | 采血时间点、检测指标、病理评分标准、TUNEL检测、Western blot抗体 阅读提示：见Methods: Tissue sampling and analysis, Biochemical assay of blood sample, Histological evaluation, Western blot analysis |