建立肺炎链球菌感染模型并评估炎症反应
验证肺炎链球菌感染是否诱导肺部炎症反应和细菌播散。
C57BL/6小鼠鼻内感染2×10^6 CFU肺炎链球菌,在感染后12、24、48小时检测细菌载量、总细胞数、中性粒细胞浸润及促炎细胞因子水平。
Production of Interleukin-20 cytokines limits bacterial clearance and lung inflammation during infection by Streptococcus pneumoniae.
包含体外细胞实验、动物感染模型和多种分子检测,验证了IL-20通路在细菌清除和炎症调控中的作用。具体包括RT-qPCR、免疫组化、ELISA、流式和体内中和抗体实验。
C57BL/6小鼠 肺炎链球菌血清型1感染小鼠模型
C57BL/6小鼠,6-8周龄,雄性 肺炎链球菌临床分离株E1586,鼻内感染2×10^6 CFU 抗IL-20Rb中和抗体(clone 20RNTC)剂量50 μg/只,腹腔注射,感染前24小时及感染后第1、3天 细菌载量检测时间点:感染后12、24、48小时
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
验证肺炎链球菌感染是否诱导肺部炎症反应和细菌播散。
C57BL/6小鼠鼻内感染2×10^6 CFU肺炎链球菌,在感染后12、24、48小时检测细菌载量、总细胞数、中性粒细胞浸润及促炎细胞因子水平。
确定肺炎链球菌感染是否改变肺组织中IL-20细胞因子和受体的表达。
通过RT-qPCR检测Il-19、Il-20、Il-24、Il-20ra、Il-20rb、Il-22ra mRNA水平,并通过免疫组化检测IL-19、IL-20、IL-24、IL-20Ra、IL-20Rb、IL-22Ra蛋白表达。
评估IL-20Rb中和抗体对肺炎链球菌感染小鼠的细菌载量和炎症反应的影响。
感染小鼠用抗IL-20Rb中和抗体或同型对照处理,检测细菌载量(BAL、肺、血液)、组织病理学评分、细胞浸润(流式)、细胞因子水平及抗菌肽mRNA表达。
确定IL-20Rb中和是否影响肺炎链球菌感染小鼠的存活率和体重变化。
感染小鼠经抗IL-20Rb抗体或对照处理,监测6天内体重和生存情况。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细菌培养 | 巧克力琼脂+PolyViteX™ | Biomérieux | -- |
| BAL | 磷酸盐缓冲液 | -- | -- |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 流式分析 | 抗IL-20Rb中和抗体 | eBioscience | clone 20RNTC |
| 同型对照抗体 | Evitria | -- | |
| 组织消化 | 胶原酶VI型 | Gibco | 17104-019 |
| 细胞分离 | Percoll | GE Healthcare | 17-0891-01 |
| 流式分析 | LSR Fortessa流式细胞仪 | BD Biosciences | -- |
| 免疫组化 | 二甲苯 | Acros Organics | -- |
| HRP/DAB检测免疫组化试剂盒 | Abcam | ab80436 | |
| 抗IL-19抗体 | Abcam | ab154187 | |
| 抗IL-20抗体 | Biorbyt | orb13501 | |
| 抗IL-24抗体 | Biorbyt | orb228807 | |
| 抗IL-20Ra抗体 | Bioss | bs-2619R | |
| 抗IL-20Rb抗体 | eBiosciences | 20RNTC | |
| 抗IL-22Ra1抗体 | R&D systems | 496514 | |
| ELISA | IL-1β ELISA试剂盒 | eBiosciences | -- |
| IL-6 ELISA试剂盒 | eBiosciences | -- | |
| IFN-γ ELISA试剂盒 | eBiosciences | -- | |
| TNF-α ELISA试剂盒 | R&D | -- | |
| IL-20 ELISA试剂盒 | Boster Biological Technology | -- | |
| IL-24 ELISA试剂盒 | Elabscience | -- | |
| RT-qPCR | TRIzol试剂 | Ambion | -- |
| 高容量cDNA逆转录试剂盒 | Applied Biosystems | -- | |
| QuantStudio 12K Flex实时荧光定量PCR仪 | Applied Biosystems | -- | |
| 免疫荧光染色 | 固红TR/萘酚AS-MX片剂 | SIGMAFAST | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物感染 | 小鼠品系、年龄、性别、感染剂量、感染途径、麻醉药物剂量与品牌 阅读提示:Material and methods部分:Animals, Infection with streptococcus pneumoniae and bacterial counts |
| 抗体治疗 | 抗IL-20Rb抗体(克隆20RNTC)剂量、给药途径、给药时间点 阅读提示:Material and methods部分:Treatment of mice with anti-IL-20Rb neutralizing antibody and Isotype control |
| 样本收集 | BAL和肺组织的收集时间、处理方法 阅读提示:Material and methods部分:Broncho-alveolar lavage and tissue preparation |
| 流式分析 | 抗体组合、荧光标记、门控策略 阅读提示:Material and methods部分:Flow cytometer reagents 和 Supplementary Figure 1 |
| 组织病理学 | 肺损伤评分标准、肺泡壁厚度测量方法 阅读提示:Material and methods部分:Lung immunohistochemistry 和 Supplementary Table 1 |