建立4T1乳腺癌小鼠模型
模拟人类IV期乳腺癌,为评估联合治疗提供体内模型。
将4T1细胞皮下注射到BALB/c小鼠右侧乳腺,建立原位移植瘤模型。
Synergistic anti-tumor effects of dasatinib and dendritic cell vaccine on metastatic breast cancer in a mouse model.
包含体外细胞培养、体内4T1移植瘤模型、组织学分析、免疫组化、TUNEL凋亡检测、存活分析及免疫细胞浸润评估等多层级验证,证据强度高。
4T1乳腺癌细胞系 BALB/c小鼠4T1原位移植瘤模型
4T1细胞接种数量:1×10^6 达沙替尼给药剂量:15 mg/kg DC疫苗注射次数和剂量:1×10^6细胞,在第10天和第17天 肿瘤体积测量频率:每隔一天 实验终点:第34天
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟人类IV期乳腺癌,为评估联合治疗提供体内模型。
将4T1细胞皮下注射到BALB/c小鼠右侧乳腺,建立原位移植瘤模型。
制备肿瘤抗原用于脉冲DC疫苗。
通过5次冻融循环裂解4T1细胞,离心去除细胞碎片,收集裂解物。
生成负载肿瘤抗原的DC疫苗以诱导抗肿瘤免疫。
从BALB/c小鼠骨髓中分离前体细胞,经GM-CSF和IL-4诱导分化为未成熟DC,再与4T1裂解物共孵育,并用LPS诱导成熟。
比较单药与联合治疗对肿瘤生长、转移和免疫的影响。
在第10天将荷瘤小鼠随机分为4组,分别接受达沙替尼、DC疫苗、联合治疗或不予处理,并按方案给药。
评估治疗对肿瘤生长和生存期的影响。
每隔一天测量肿瘤体积,记录生存期,直至第34天。
评估肿瘤增殖、血管生成及免疫细胞浸润。
对肿瘤组织进行H&E染色和免疫组化染色,检测Ki67、CD31、CD8、NKG2D的表达。
评估治疗对肿瘤细胞凋亡的影响。
使用TUNEL试剂盒检测肿瘤组织中的凋亡细胞。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | RPMI-1640培养基 | HyClone; GE Healthcare Life Sciences | -- |
| 胎牛血清 | Tianjin Haoyang Biological Products Technology Co., Ltd. | -- | |
| DC疫苗制备 | 重组小鼠GM-CSF | PeproTech | -- |
| 重组小鼠IL-4 | PeproTech | -- | |
| 脂多糖 | Sigma-Aldrich; Merck KGaA | -- | |
| 药物处理 | 达沙替尼 | Selleck Chemicals | -- |
| Labrasol | Gattefosse (Shanghai) Trading Co., Ltd. | -- | |
| 组织学与免疫组化 | 柠檬酸钠缓冲液 | -- | -- |
| 牛血清白蛋白 | Boster Biological Technology | -- | |
| 兔抗小鼠NKG2D抗体 | Bioss | bs-0938R | |
| 兔抗小鼠CD8抗体 | Bioss | bs-10699R | |
| 兔抗小鼠KI67抗体 | Bioss | bs-23105R | |
| 兔抗小鼠CD31抗体 | Bioss | bs-20322R | |
| 亲和素-生物素-过氧化物酶偶联的山羊抗兔IgG | Boster Biological Technology | SA1022 | |
| TUNEL检测 | 原位细胞死亡检测试剂盒 | Roche Diagnostics | -- |
| 统计分析 | GraphPad Prism 6.01 | GraphPad Software, Inc. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养 | 4T1细胞培养条件:RPMI-1640培养基加入10% FCS,37°C;4T1细胞来源:中国科学院上海生命科学研究院细胞库。 阅读提示:Methods, Cell culture |
| DC疫苗制备 | 骨髓细胞培养条件:2×10^6细胞/100-mm培养皿,RPMI-1640+10%FCS+20ng/ml GM-CSF+10ng/ml IL-4;4T1裂解物与DC比例1:3,孵育18h;LPS成熟刺激1-2天(1 µl/ml)。 阅读提示:Methods, Tumor lysate-pulsed DCs |
| 动物模型与治疗 | 4T1细胞接种量:1×10^6;小鼠品系:BALB/c雌性6周龄;分组:4组,n=8;达沙替尼剂量:15 mg/kg,口服灌胃每日一次连续7天;DC疫苗注射剂量:1×10^6细胞,第10天和第17天;肿瘤体积测量:每隔一天。 阅读提示:Methods, Tumor model and treatment protocol |
| 免疫组化与TUNEL | 抗体孵育条件:1:200稀释,4°C过夜;TUNEL试剂盒:Roche;阳性细胞计数:Ki67、CD8、NKG2D在400×下随机5个视野;微血管密度:每肿瘤5个视野;TUNEL:随机10个视野。 阅读提示:Methods, Histology and immunohistochemistry; Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) |