样本采集与分组
获取不同距离的瘤周组织,比较微环境成分的差异。
从48例结直肠癌患者中收集距病灶≥10 cm、5 cm和≤2 cm的组织样本各一份,共144份,进行后续检测。
Analysis of different components in the peritumoral tissue microenvironment of colorectal cancer: A potential prospect in tumorigenesis.
研究包含患者样本的免疫组化检测和统计学分析,但缺乏功能验证和机制验证,实验完整度中等。
结直肠癌患者瘤周组织样本(距病灶10、5、2厘米)
样本采集:48例患者,取自距结直肠癌病灶≥10 cm、5 cm和≤2 cm的三个部位 免疫组化检测:10种生物标志物(E-cadherin、CK18、CRB3、PAR-3、Hyal-1、Col-I、vimentin、α-SMA、CD1、CD133),一抗1:100,二抗1:1000 染色评分:两名病理学家,强度0-3,反应面积百分比1-4,免疫反应评分=强度×面积 统计分析:单因素方差分析或非参数秩和检验,P<0.05为差异有统计学意义
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取不同距离的瘤周组织,比较微环境成分的差异。
从48例结直肠癌患者中收集距病灶≥10 cm、5 cm和≤2 cm的组织样本各一份,共144份,进行后续检测。
观察结肠隐窝结构变化,评估组织病变程度。
对组织切片进行HE染色,观察隐窝形态,并分析异常隐窝灶。
检测10种生物标志物在不同距离组织中的表达水平。
使用免疫组化染色检测E-cadherin、CK18、CRB3、PAR-3、Hyal-1、Col-I、vimentin、α-SMA、CD1和CD133的表达,并进行评分和光密度测量。
比较三组间生物标志物表达的差异,并进行功能聚类分析。
使用单因素方差分析或非参数秩和检验比较不同部位表达差异,采用层次指数聚类分析进行功能相关分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组化 | 抗E-钙黏蛋白抗体 | Abcam | ab15148 |
| 抗CRB3抗体 | Abcam | ab180835 | |
| 抗α-平滑肌肌动蛋白抗体 | Abcam | 124964 | |
| 抗PAR-3抗体 | Bioss | bs-9510R | |
| 抗Hyal-1抗体 | Abcam | ab103977 | |
| 抗I型胶原蛋白抗体 | Abcam | ab6308 | |
| 抗细胞角蛋白18抗体 | Bioss | bs-1339R | |
| 抗波形蛋白抗体 | Bioss | bs-8533R | |
| 抗细胞周期蛋白D1抗体 | Bioss | bs-0623R | |
| 抗CD133抗体 | Bioss | bs-0395R | |
| 生物素偶联的山羊抗兔二抗 | Wuhan Boster Biological Technology | SA1022 | |
| 辣根过氧化物酶偶联的山羊抗小鼠二抗 | Wuhan Boster Biological Technology | BA1051 | |
| 抗大鼠二抗 | Wuhan Boster Biological Technology | SA1025 | |
| 牛血清白蛋白 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 图像分析 | IPP 6.0 | Media Cybernetics | -- |
| 统计分析 | Stata 12.0 | StataCorp | -- |
| 图像分析 | GenePix Pro软件 | Molecular Devices | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本采集 | 患者纳入标准和排除标准 阅读提示:Materials and methods, Sample collection |
| 样本分组 | 距病灶距离:≥10 cm、5 cm、≤2 cm 阅读提示:Materials and methods, Sample collection; Figure 1 |
| 免疫组化 | 一抗浓度、二抗浓度、孵育时间、抗原修复条件 阅读提示:Materials and methods, Immunohistochemical staining |
| 染色评分 | 免疫反应评分标准(强度和面积) 阅读提示:Materials and methods, Immunohistochemical staining |
| 统计方法 | 使用的统计检验和显著性阈值 阅读提示:Materials and methods, Statistical analysis |