结核分枝杆菌10-kDa共伴侣蛋白调节人成骨细胞中核因子κB受体活化因子配体和骨保护素的表达水平

本研究旨在探讨重组结核分枝杆菌(r-Mt)10-kDa共伴侣蛋白(cpn10)对第三代培养成骨细胞中骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。成骨细胞样培养物分离自接受手术患者的手术骨碎片。在给予r-Mt cpn10刺激之前，细胞在无血清培养基中孵育24小时。将r-Mt cpn10加入新鲜无血清培养基中，终浓度为0.01–10 μg/ml。采用酶联免疫吸附测定法检测OPG的水平。进行逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析以测定RANKL和OPG mRNA的水平。为了测量OPG和RANKL的蛋白水平，进行了western blotting分析。r-Mt cpn10在10 μg/ml剂量下下调第三代培养成骨细胞中OPG的蛋白水平。RT-qPCR显示，与r-Mt cpn10(10 μg/ml)孵育4小时后OPG mRNA水平降低73%，8小时后降低85.5%。Western blot分析显示OPG蛋白水平有类似结果。在第三代培养的成骨细胞中，与r-Mt cpn10(10 μg/ml)孵育后，RANKL mRNA和蛋白水平分别增加2.6倍和1倍。此外，r-Mt cpn10(10 μg/ml)处理显著增加了RANKL/OPG比值。总之，本研究结果表明r-Mt cpn10以剂量和时间依赖的方式降低OPG水平并增加RANKL水平。值得注意的是，本研究表明r-Mt cpn10通过增加RANKL/OPG比值对成骨细胞发挥作用。