志贺毒素大肠杆菌SubAB进入HeLa细胞需要肌动蛋白和脂筏依赖性途径

新型细胞毒性因子枯草酶细胞毒素（SubAB）主要由非O157志贺毒素大肠杆菌（STEC）产生。SubAB在内质网（ER）中切割分子伴侣BiP/GRP78，导致RNA依赖性蛋白激酶（PKR）样ER激酶（PERK）的激活，随后引发caspase依赖性细胞死亡。然而，SubAB在HeLa细胞中的摄取机制尚不清楚。本研究采用多种抑制剂和siRNA来表征SubAB的摄取过程。高浓度的Dynasore以及甲基-β-环糊精（mβCD）和菲律宾菌素III可抑制SubAB诱导的BiP切割，但在网格蛋白、发动蛋白I/II、小窝蛋白1和小窝蛋白2敲低细胞中并未受到抑制。我们观察到SubAB处理导致显著的肌动蛋白重排，例如质膜起泡的形成，伴随液体摄取显著增加。共聚焦显微镜分析显示，SubAB摄取需要肌动蛋白细胞骨架重塑和脂筏胆固醇。此外，内化的SubAB细胞存在于去污剂抗性结构域（DRM）结构中。有趣的是，IPA-3（一种丝氨酸/苏氨酸激酶p21活化激酶（PAK1）的抑制剂，它是巨胞饮的重要蛋白）直接抑制了SubAB介导的BiP切割和SubAB内化。因此，我们的研究结果表明，SubAB利用脂筏和肌动蛋白依赖性途径作为其主要的内吞转运途径，而非网格蛋白、小窝蛋白和发动蛋白依赖性途径。