抗体的生成与体外活性验证
确认GenSci120特异性结合PD-1并直接激活PD-1信号通路
通过CHO细胞表达不同种属PD-1，用流式检测结合；使用SHP2报告细胞检测SHP2募集；使用NFAT报告细胞检测T细胞抑制；通过SARS-CoV-2抗原回忆实验检测原代T细胞增殖抑制。
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一种用于治疗自身免疫性疾病的PD-1导向抗体的双重激动和选择性T细胞耗竭活性
Dual agonism and selective T-cell depletion activity of a PD-1-directed antibody for treating autoimmune diseases.
实验完整度
高包含体外分子结合、细胞功能、动物疾病模型及I期临床等多个独立验证层级，并验证了机制与疗效。
主要模型
CHOS-hPD-1细胞 Jurkat-PD-1(Sluc)-SHP2(Lluc)报告T细胞 B-NDG小鼠GVHD模型 C57BL/6-hPD-1小鼠CIA模型 bm12小鼠SLE模型 健康成人受试者
重点核对
GenSci120的种属结合特异性（人、食蟹猴，非小鼠PD-1） SHP2募集活性，EC50为0.068 nM ADCC活性，EC50为1.9 pM GVHD模型中10 mg/kg每周两次给药方案 I期临床中50 mg和150 mg剂量的药代动力学和药效学数据
摘要
在不伴随全身免疫抑制的情况下精确抑制自身反应性是治疗自身免疫性疾病的一个尚未实现的首要目标。PD-1优先表达于驱动自身免疫的活化T细胞上，这些PD-1+ T细胞可作为治疗干预的靶点。在此，我们报道了一种独特的PD-1激动性抗体GenSci120的发现，该抗体在体外表现出强效且选择性的T细胞抑制作用，并在体外和体内均表现出T细胞耗竭活性。GenSci120的靶点结合直接促进SHP2向PD-1信号通路的募集，同时增强PD-1与其天然配体的结合，并增强PD-L1诱导的PD-1信号传导。此外，GenSci120在几种人类自身免疫性疾病动物模型中表现出强大的疗效。因此，GenSci120通过选择性耗竭PD-1+ T细胞以及直接（通过PD-1结合和SHP2募集）或间接（通过增强PD-1与配体相互作用）刺激PD-1信号传导，能够恢复自身免疫中的免疫平衡。在一项健康成人的首次人体研究中（NCT06827457），GenSci120表现出良好的安全性/耐受性和药代动力学特征，以及强大的药效学效应。总之，这些发现提示GenSci120作为治疗自身免疫性疾病的创新精准药物的潜力，并支持在未来临床试验中进一步评估这一在研新药。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 是否可以开发出一种PD-1激动性抗体，能够选择性抑制和耗竭致病性PD-1+ T细胞，用于治疗自身免疫性疾病而不引起全身免疫抑制？
- 核心机制
- GenSci120通过直接结合PD-1促进SHP2募集，并通过增强PD-1与其天然配体PD-L1/PD-L2的结合，直接或间接增强PD-1信号传导，同时通过ADCC活性选择性耗竭PD-1+ T细胞。
- 主要证据
- 体外实验显示SHP2募集和T细胞抑制；动物疾病模型（GVHD、CIA、SLE）中减轻疾病并降低自身抗体；I期临床显示选择性耗竭外周PD-1+ T细胞。
- 研究意义
- GenSci120作为精准医疗方法，选择性靶向PD-1+ T细胞，有望为多种自身免疫性疾病提供治疗选择。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
分子机制解析：增强PD-1配体结合与SHP2募集
评估GenSci120对PD-1与配体结合的影响及对PD-L1诱导信号的作用
FCM检测PD-L1/PD-L2与GenSci120结合后PD-1的结合变化；SPR测量亲和力；使用F(ab')2片段和Raji-PD-L1细胞检测PD-L1诱导的SHP2募集。
表位定位与结构解析
确定GenSci120在PD-1上的独特结合位点
使用嵌合PD-1蛋白进行表位分析；通过cryo-EM解析GenSci120-PD-1复合物结构；基于结构设计点突变并用BLI验证。
体外ADCC活性验证
确认GenSci120通过Fc介导的效应功能耗竭PD-1+细胞
LDH释放实验，以原代NK细胞为效应细胞，CHOS-hPD-1为靶细胞，检测细胞裂解。
体内疗效评估：GVHD模型
验证GenSci120在移植物抗宿主病模型中的疗效
B-NDG小鼠注射人PBMCs诱导GVHD，腹腔注射GenSci120或对照抗体，监测临床评分和生存。
体内疗效评估：CIA模型
评估GenSci120在胶原诱导关节炎模型中的作用
C57BL/6-hPD-1小鼠用II型胶原免疫，分组后给予GenSci120或对照，监测临床评分、体重、病理和自身抗体。
体内疗效评估：SLE模型
验证GenSci120在系统性红斑狼疮模型中的疗效和T细胞耗竭
bm12小鼠过继转移C57BL/6-hPD-1脾细胞，不同剂量GenSci120处理，ELISA检测自身抗体，FCM分析脾脏T细胞。
首次人体研究：安全性、药代动力学和药效学
评估GenSci120在健康成人中的安全性、耐受性、PK和PD
单中心、随机、双盲、安慰剂对照的SAD研究，皮下注射GenSci120，检测PK参数和PD-1+ T细胞变化。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | CHOS | -- | -- |
| RPMI-1640培养基 | 文中未明确说明 | -- | |
| 分子相互作用 | Octet® ProA生物传感器 | Sartorius | -- |
| Biacore CM5传感芯片 | Cytiva | -- | |
| SpectraMax iD5酶标仪 | Molecular Devices | -- | |
| ADCC | CytoTox96非放射性细胞毒性检测试剂盒 | Promega | G1780 |
| Triton X-100 | Sigma | T9284 | |
| ELISA | 小鼠抗dsDNA Ig ELISA试剂盒 | Alpha Diagnostic Intl | 5120 |
| 小鼠抗组蛋白Ig ELISA试剂盒 | Alpha Diagnostic Intl | 5610 | |
| 小鼠抗鸡II型胶原IgG2a抗体亚型检测试剂盒 | Chondrex | 20312T | |
| 动物实验 | 不完全弗氏佐剂 | -- | -- |
| 地塞米松 | -- | -- | |
| 细胞实验 | CFSE | Invitrogen | 65-0850-84 |
| 7-AAD | eBioscience | 00-6993-50 | |
| 流式 | PE标记的山羊抗人IgG二抗 | Jackson | 109-115-098 |
| PE标记链霉亲和素 | BD Biosciences | 554061 | |
| BV421标记小鼠抗人CD4抗体 | BD | 562842 | |
| APC标记抗人PD-1抗体 | eBioscience | 12-2799-42 | |
| PE标记抗人PD-1抗体 | eBioscience | 12-2799-41 | |
| BV605标记抗小鼠CXCR5抗体 | BioLegend | 145513 | |
| 可固定活力染料620 | BD | 564996 | |
| APC-Cy7标记抗小鼠CD45抗体 | BD | 557659 | |
| BV510标记抗小鼠CD3ε抗体 | BD | 563024 | |
| BUV395标记抗小鼠CD4抗体 | BD | 563790 | |
| AF700标记抗小鼠CD8a抗体 | BD | 557959 | |
| 分子实验 | IdeS蛋白酶 | Promega | V7511 |
| 2-巯基乙胺•盐酸盐 | -- | -- | |
| 细胞刺激 | SARS-CoV-2肽 | GenScript | -- |
| 细胞培养 | CD3激活剂 | -- | -- |
| PK检测 | 重组人PD-1蛋白 | Sino Biological | 10377-HO8H |
| HRP标记小鼠抗人IgG1抗体 | Invitrogen | A10648 | |
| cryo-EM | Titan Krios电子显微镜 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| K3直接电子探测器 | Gatan | -- | |
| Vitrobot MarkIV | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 数据分析 | GraphPad Prism | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| SHP2募集实验 | Jurkat-PD-1(Sluc)-SHP2(Lluc)报告细胞与THP-1共培养比例；GenSci120浓度范围；孵育时间20小时；Nano-Glo检测 阅读提示：Materials and methods: SHP2 recruitment assay |
| NFAT报告基因实验 | Jurkat-PD1-NFAT细胞与THP-1共培养比例；CD3激活剂浓度0.01 nM；孵育时间16小时；Bright-Lite检测 阅读提示：Materials and methods: NFAT reporter gene assay |
| 外周血T细胞增殖抑制 | PBMC供体HLA类型；CFSE浓度；SARS-CoV-2肽池浓度16.67 μg/mL每个肽；孵育6天；CD4+ T细胞增殖检测 阅读提示：Materials and methods: Primary human T-cell activation and proliferation assay |
| PD-L1/PD-L2结合增强实验 | CHOS-hPD-1细胞密度；GenSci120浓度；PD-L1-Fc和PD-L2-Fc浓度；孵育时间30分钟；PE-streptavidin检测 阅读提示：Materials and methods: GenSci120-PD-1-PD-L1/PD-L2 binding assays |
| ADCC实验 | 效应细胞（NK）与靶细胞（CHOS-hPD-1）比例；孵育时间24小时；LDH释放检测 阅读提示：Materials and methods: ADCC assay |
| GVHD模型 | B-NDG小鼠周龄、性别；人PBMC数量；GenSci120剂量和给药频率；监测参数和周期 阅读提示：Materials and methods: GVHD model |
| CIA模型 | C57BL/6-hPD-1小鼠性别、周龄；胶原免疫剂量和佐剂；GenSci120剂量和给药频率；地塞米松剂量和给药方式；动物分组和数量 阅读提示：Materials and methods: CIA model |
| SLE模型 | bm12小鼠性别、周龄；脾细胞数量；GenSci120剂量和给药频率；环磷酰胺剂量和给药方式；自身抗体检测时间点 阅读提示：Materials and methods: SLE model |
| 临床研究 | 健康成人年龄范围；GenSci120剂量范围；给药途径；PK采血时间点；PD分析T细胞亚群 阅读提示：Materials and methods: Phase 1 clinical study design, PK assay, PD effect |
| cryo-EM结构解析 | 蛋白复合物制备比例；冷冻制样条件；数据收集参数；图像处理软件和参数 阅读提示：Materials and methods: Determination of cryo-EM structure |