一种用于生产抗狂犬病毒双特异性抗体的新型双向启动子单载体

背景：世界卫生组织（WHO）推荐使用两种不重叠的单克隆抗体（mAbs）联合治疗，以增强狂犬病暴露后预防（PEP）的保护效果。虽然双特异性抗体（bsAbs）通过同时靶向两个不同的表位，比单克隆抗体提供更好的保护，但其开发受到复杂且低效的载体设计的阻碍。在本研究中，我们旨在开发一种新型单载体表达系统，以高效生产有效的抗狂犬病毒（RABV）中和双特异性抗体。结果：我们设计了一种极简的peaSKYA单载体，具有双向双CMV启动子，能够在单一构建体中同步共表达抗体重链（HC）和轻链（LC）。通过消除冗余的骨架元件，与双载体系统相比，该优化载体将表达盒比例提高了17%，转染效率提高了32%。该平台在HEK293F瞬时表达中双特异性抗体的产量提高了2倍，其中四价DVD-Ig格式抗体HHDVD在基于假病毒的中和试验（PBNA，2193.19 IU/mg）和快速荧光灶抑制试验（RFFIT，1679.52 IU/mg）中均表现出显著增强的中和效力。结论：我们开发了peaSKYA单载体表达系统，用于高效生产双特异性抗体，其中候选药物HHDVD在狂犬病PEP中显示出潜力。这种简化的载体设计方法在双特异性中和抗体开发中展现出显著潜力，为其他工程化双特异性抗体提供了一个可转移的平台。