小鼠免疫原性及攻毒保护评估
验证NTV疫苗在小型动物模型中的免疫原性和保护效力。
BALB/c小鼠以不同剂量NTV（1×107至5×108 PFU）进行两剂免疫，评估结合抗体和中和抗体；随后用1×108 PFU进行一剂或两剂免疫，评估T细胞反应；并以VACV WR（鼻内）和MPXV clade IIb（腹腔）攻毒。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
基于天坛株痘苗病毒、具有良好安全性的候选疫苗在非人灵长类中针对猴痘提供持续保护
Tiantan vaccinia virus-based vaccine with promising safety provides sustained protection against mpox in non-human primates.
实验完整度
高包含小鼠、猕猴和食蟹猴体内实验，以及基于细胞系的体外实验；涵盖免疫原性、攻毒保护、长期保护、单剂量及安全性评估，且具备功能验证和机制关联分析。
主要模型
小鼠模型（BALB/c和CAST/EiJ） 恒河猴模型 食蟹猴模型 Vero E6细胞
重点核对
NTV免疫剂量（1×108 PFU）及给药方式（肌内注射） 攻毒病毒株（MPXV clade IIb， MPXV-B.1-China-C-Tan-CQ01）和攻毒途径（静脉注射） 攻毒剂量（4×107 TCID50）和攻毒时间（加强免疫后21天） 评价指标（皮肤病变计数、血浆病毒载量、中和抗体滴度） 样本量（每组6只恒河猴）和统计方法（ANOVA）
摘要
世界卫生组织（WHO）已宣布猴痘疫情为国际关注的突发公共卫生事件（PHEIC）。迫切需要安全有效的猴痘病毒（MPXV）疫苗来阻止病例激增。在此，我们报告了一项采用不同给药策略的临床前研究结果，该研究针对名为NTV的候选疫苗，该疫苗通过在天坛株痘苗病毒中进行靶向基因删除，产生复制缺陷型变体。在小鼠模型中优化NTV免疫剂量并确认其对MPXV的保护效力后，我们证明在猕猴中两次接种NTV方案可引发显著的中和抗体和细胞免疫反应，提供针对MPXV攻击的有效保护。值得注意的是，我们发现在猕猴中单次NTV剂量或长期免疫可通过增强细胞免疫和快速唤起中和抗体，针对中度或重度猴痘疾病提供有效保护。这些结果表明该疫苗在紧急使用和长期保护方面的潜力。安全性评估显示，接受三倍标准剂量连续三次注射的猕猴未出现不良影响。这些发现凸显了NTV候选疫苗的潜力，其在临床前环境中具有强免疫原性、持续保护效力和安全性等关键优势。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 评估基于天坛株痘苗病毒的复制缺陷型候选疫苗NTV在非人灵长类中的免疫原性、保护效力、长期免疫持久性和安全性。
- 核心机制
- NTV通过靶向删除26个与宿主范围和毒力相关的基因，使其在人类细胞中复制缺陷，但仍保留免疫原性；其保护作用与中和抗体和CD8+ T细胞反应相关。
- 主要证据
- 在小鼠和猕猴中验证了免疫原性；在恒河猴中，两剂NTV（1×108 PFU）提供近乎完全保护，单剂和长期免疫（8个月）也提供保护，且安全性评估显示3倍剂量无不良影响。
- 研究意义
- NTV候选疫苗具有强免疫原性、持续保护效力和良好的安全性，适用于紧急使用和长期保护，尤其可能适用于免疫功能低下人群，并支持其临床开发。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
恒河猴两剂免疫免疫原性评估
评估不同剂量NTV两剂免疫在恒河猴中诱导的体液和细胞免疫反应。
24只恒河猴分为4组，分别接受不同剂量NTV（2×107、1×108、2×108 PFU）或生理盐水，肌内注射，第0天和第28天。检测NTV和MPXV特异性IgG、VACV和MPXV中和抗体，并通过ICS检测CD4+和CD8+ T细胞反应。
恒河猴两剂免疫攻毒保护评估
评估NTV两剂免疫对恒河猴MPXV攻毒的保护效力。
在加强免疫后第21天（第49天），所有恒河猴经静脉注射4×107 TCID50的MPXV clade IIb，监测10天和28天内的皮肤病变、血浆病毒载量、中和抗体和组织病毒载量。
长期保护评估
评估NTV两剂免疫在8个月后的长期保护效力。
将前期免疫的4只恒河猴（不同剂量组）在8个月后再次进行MPXV攻毒，评估皮肤病变、血浆病毒载量、中和抗体和记忆T细胞表型。
单次免疫攻毒保护评估
评估单次NTV免疫对恒河猴MPXV攻毒的快速保护作用。
4只恒河猴接受单剂NTV（1×108 PFU）或生理盐水，28天后进行MPXV攻毒，监测28天内的皮肤病变、血浆病毒载量和中和抗体。
食蟹猴安全性评估
评估NTV疫苗在食蟹猴中的安全性，包括高剂量和多次免疫。
30只食蟹猴分为3组，分别接受生理盐水、1倍或3倍标准剂量NTV，共3次，间隔21天。监测病毒吸收动力学、脱落、生物分布、血压、血氧、血液学、细胞因子和组织病理学。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | GIBCO | -- |
| 胎牛血清 | GIBCO | -- | |
| 青霉素-链霉素 | -- | -- | |
| ELISA | A35R蛋白 | Sino Biological | 40886-V08H |
| B6R蛋白 | Sino Biological | 40902-V08H | |
| H3L蛋白 | Sino Biological | 40893-V08H1 | |
| M1R蛋白 | Sino Biological | 40904-V07H | |
| HRP标记的山羊抗猴IgG | Abcam | -- | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG | Abcam | -- | |
| HRP标记的兔抗小鼠IgG | Abcam | -- | |
| TMB底物 | R&D | -- | |
| 终止液 | R&D | -- | |
| SpectraMax iD5多功能酶标仪 | Molecular Devices | -- | |
| ELISpot | IFN-γ预包被ELISPOT试剂盒 | MabTech | 3321-2A |
| 佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯 | -- | -- | |
| 离子霉素 | Thermo Fisher | -- | |
| 生物素化抗小鼠IFN-γ抗体 | -- | -- | |
| 链霉亲和素-碱性磷酸酶 | -- | -- | |
| BCIP/NBT-plus底物 | -- | -- | |
| IRIS ELISPOT读板仪 | Mabtech | -- | |
| 流式细胞术 | CD49d单克隆抗体 | BD Biosciences | -- |
| CD28单克隆抗体 | BD Biosciences | -- | |
| 布雷菲德菌素A | Sigma | -- | |
| 可固定活力染料 | Invitrogen | -- | |
| 抗CD3-BV650抗体 | BD Bioscience | 563916 | |
| 抗CD4-BV510抗体 | Biolegend | 317444 | |
| 抗CD8-BUV737抗体 | BD Bioscience | 612754 | |
| 抗IFN-γ-AF700抗体 | BD Bioscience | 557995 | |
| 抗IL-2-PE抗体 | BD Bioscience | 559334 | |
| 抗TNF-α-FITC抗体 | BD Bioscience | 554512 | |
| Cytofix/Cytoperm试剂盒 | BD Bioscience | -- | |
| 抗CD45RA-BV711抗体 | BD Bioscience | 740806 | |
| 抗CCR7-BV605抗体 | Biolegend | 353224 | |
| BD LSR Fortessa流式细胞仪 | BD Bioscience | -- | |
| FlowJo软件 | -- | -- | |
| 病毒载量检测 | DNeasy Blood & Tissue试剂盒 | QIAGEN | -- |
| ABI 7500实时PCR系统 | Applied Biosystems | -- | |
| TaqMan基因表达预混液 | Applied Biosystems | -- | |
| 细胞因子分析 | 流式微球阵列试剂盒 | BD Bioscience | -- |
| Beckman DxFLEX流式细胞仪 | Beckman | -- | |
| 临床化学分析 | TBA-120FR全自动生化分析仪 | TOSHIBA | -- |
| 抗核抗体检测 | 抗核抗体检测试剂盒 | Oumeng | -- |
| 组织病理学分析 | 3D Histech Pannoramic MIDI显微镜 | 3D Histech | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 免疫原性评估（小鼠） | 小鼠品系、年龄、性别；NTV剂量（1×107-5×108 PFU）；免疫途径（i.m.）；免疫时间（第0天和第28天）；取血时间点（第7、14、21天等） 阅读提示：Methods: Mice study; Figure 1b, c |
| 攻毒实验（小鼠） | 攻毒病毒株（VACV WR、MPXV clade IIb）；攻毒剂量（1×106 TCID50）；攻毒途径（i.n.或i.p.）；攻毒时间（加强免疫后14天）；监测指标（体重、生存率、组织病毒载量） 阅读提示：Methods: Mice study; Figure 1f, g |
| 免疫原性评估（恒河猴） | 恒河猴品系、年龄、性别；NTV剂量（2×107、1×108、2×108 PFU）；免疫途径（i.m.）；免疫时间（第0天和第28天）；取血时间点（第0、28、42天） 阅读提示：Methods: Nonhuman primate studies - Study I; Figure 2a |
| 攻毒实验（恒河猴，两剂） | MPXV clade IIb毒株；攻毒剂量（4×107 TCID50）；攻毒途径（i.v.）；攻毒时间（加强免疫后21天）；监测时间点（0、4、7、10、14、21、28天）；安乐死时间（10、28天） 阅读提示：Methods: Nonhuman primate studies - Study I; Figure 3a |
| 长期保护（恒河猴） | 攻毒时间（初次免疫后8个月）；攻毒剂量（4×107 TCID50）；攻毒途径（i.v.）；监测指标（皮肤病变、血浆病毒载量） 阅读提示：Methods: Nonhuman primate studies - Study II; Figure 4a |
| 单次免疫（恒河猴） | 单次免疫剂量（1×108 PFU）；免疫途径（i.m.）；攻毒时间（免疫后28天）；攻毒剂量（4×107 TCID50）；攻毒途径（i.v.） 阅读提示：Methods: Nonhuman primate studies - Study II; Figure 5a |
| 安全性评估（食蟹猴） | 剂量（1倍、3倍标准剂量）；免疫次数（3次）；间隔（21天）；安乐死时间（第45天和第70天）；监测指标（血压、血氧、血液学、细胞因子、组织病理学等） 阅读提示：Methods: Nonhuman primate studies - Study III; Figure 6a, 7a-e |
| 中和抗体检测 | Vero E6细胞培养条件；病毒量（100 PFU）；血清稀释倍数；温育时间；甲基纤维素浓度；固定染色步骤 阅读提示：Methods: Plaque reduction neutralization titer (PRNT) assay |
| ELISA检测 | 包被抗原（NTV、A35R、B6R、H3L、M1R）和浓度；血清初始稀释度（1:100）及梯度；二抗稀释度；TMB底物温育时间 阅读提示：Methods: Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) |