疫苗设计与构建
构建表达不同VOC Spike蛋白的腺病毒载体疫苗。
基于hAdV5/3平台，将不同VOC的Spike基因插入腺病毒载体，并进行突变修饰。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
祖先株和VOC匹配的腺病毒载体疫苗的交叉保护和交叉中和能力
Cross-protection and cross-neutralization capacity of ancestral and VOC-matched SARS-CoV-2 adenoviral vector-based vaccines.
实验完整度
高包含体外细胞实验（Spike表达与流式）、小鼠免疫原性实验（ELISA、ELISpot、假病毒中和）、K18-hACE2小鼠活病毒攻毒实验（病毒载量、病理、免疫组化），多个独立证据层级。
主要模型
BALB/c小鼠 K18-hACE2转基因小鼠 Hs 729 T人肌肉肉瘤细胞 HEK293T细胞
重点核对
疫苗剂量：108或109病毒颗粒（vp） 免疫途径：后腿肌肉注射 攻毒剂量：Gamma 1×10^4 TCID50，Delta 5×10^5 TCID50，Omicron BA.1 3.5×10^4 TCID50 攻毒途径：鼻内感染（50 μl） 血清中和实验：使用假病毒，ID50计算
摘要
COVID-19疫苗最初基于祖先Spike蛋白设计，但新出现的关切变异株（VOC）的免疫逃逸危及了其效力，需要变异株不依赖的疫苗。在此，我们使用临床前啮齿动物模型来建立表达VOC匹配Spike的腺病毒载体疫苗的交叉保护和交叉中和能力。与Delta Plus Spike匹配的CoroVaxG.3-D.FR对匹配的VOC和错配变异株显示出最高水平的nAb。在老龄K18-hACE2小鼠中对病毒感染的交叉保护显示不同疫苗之间存在显著差异。针对Delta的疫苗完全保护小鼠免受Gamma的攻击，而基于Gamma的疫苗对Delta的攻击仅提供部分保护。在初免/加强方案中给予CorovaxG.3-D.FR显示，加强免疫能够提高血清对所有变异株的中和能力，并完全保护老龄K18-hACE2小鼠免受Omicron BA.1的感染，与BA.1匹配的疫苗一样。在所有情况下，血清对Omicron BA.2和BA.5的中和能力降低。总之，数据表明，使用基于抗原性遥远变异株（如Delta或BA.1）的疫苗进行加强免疫，有潜力保护更广泛的SARS-CoV-2谱系，尽管对突破性感染的仔细监测将有助于评估针对尚未出现的抗原性分歧变异株的组合疫苗。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 评估基于腺病毒载体的VOC匹配疫苗的交叉保护和交叉中和能力，为选择广谱疫苗候选提供依据。
- 核心机制
- 疫苗诱导的抗体交叉反应性受Spike变异株抗原性差异影响；Delta Plus Spike疫苗因携带K417N等突变，可诱导针对多种变异株的中和抗体。
- 主要证据
- 在BALB/c小鼠中检测IgG和假病毒中和；在K18-hACE2小鼠中进行不同VOC攻毒实验，评估病毒载量、病理和体重变化。
- 研究意义
- 研究表明，基于抗原性遥远变异株（如Delta或BA.1）的加强免疫有潜力提供更广泛的SARS-CoV-2谱系保护，为疫苗策略提供参考。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
免疫原性评估
评估疫苗诱导的体液和细胞免疫反应。
BALB/c小鼠免疫后采集血清，进行ELISA检测IgG、假病毒中和实验和IFN-γ ELISpot。
活病毒攻毒保护实验
评估疫苗对异源VOC攻毒的保护效力。
K18-hACE2小鼠免疫后，用不同VOC进行鼻内攻毒，检测病毒载量、组织病理和免疫组化。
交叉中和实验
评估疫苗血清对多种VOC假病毒的中和能力。
使用假病毒中和实验测定血清ID50，并构建抗原图谱。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | HEK293T细胞系 | ATCC | CRL-3216 |
| Hs 729 T细胞系 | ATCC | HTB-153 | |
| 胎牛血清 | Natocor | -- | |
| 病毒扩增 | CellSTACK细胞培养室 | Corning | -- |
| 病毒纯化 | CsCl密度梯度离心 | -- | -- |
| Western blot | 抗Spike抗体 | Sino Biological | 40150-T62 |
| 抗α-微管蛋白抗体 | Abcam | Ab18251 | |
| 流式分析 | StemPro Accutase细胞分离液 | Life Technologies | A11105-01 |
| 可固定活力染料510 | BD Horizon | 564406 | |
| 抗S1(NTD)抗体 | Cell Signaling Technology | E7M5X | |
| 抗RBD抗体 | Sino Biological | 40592-MM117 | |
| 抗RBD抗体 | Sino Biological | 40592-R0004 | |
| Cy-5标记的驴抗小鼠二抗 | Jackson Immunoresearch | 715-175-150 | |
| 抗兔二抗 | Jackson Immunoresearch | 711-175-152 | |
| FACS Aria流式细胞仪 | Becton-Dickinson | -- | |
| ELISA | ELISA板 | BRAND GMBH | -- |
| SARS-CoV-2 Wu-1 Spike蛋白 | Sino Biological | 40589-V08B1 | |
| SARS-CoV-2 Delta Spike蛋白 | Sino Biological | 40589-V08B16 | |
| SARS-CoV-2 BA.1 Spike蛋白 | Sino Biological | 40589-V08H26 | |
| HRP标记的山羊抗小鼠IgG H&L抗体 | Abcam | ab6789 | |
| TMB底物溶液 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Bio-Rad Model 550酶标仪 | Bio-Rad Laboratories | -- | |
| ELISPOT | 小鼠IFN-γ检测试剂盒 | R&D Systems | -- |
| PepTivator SARS-CoV-2 Prot_S肽池 | Miltenyi Biotec | -- | |
| CTL-ImmunoSpot S6显微分析仪 | Cellular Technology Limited | -- | |
| 病毒载量 | QIAamp病毒RNA小提试剂盒 | Qiagen | -- |
| LightMix模块化SARS-CoV检测试剂盒 | TIB MOLBIO | -- | |
| 组织病理 | 3-氨丙基三乙氧基硅烷 | Sigma-Aldrich | -- |
| 免疫组化 | 抗CD3抗体 | DAKO | A0452 |
| 抗SARS-CoV-2 N蛋白抗体 | Sino Biological | 40143-T62 | |
| CytoScan HRP检测系统 | -- | -- | |
| 液体DAB-Plus底物试剂盒 | Invitrogen | -- | |
| 假病毒构建 | G*DG-荧光素酶重组VSV | Kerafast | -- |
| Optimem培养基 | Gibco | -- | |
| Lipofectamine 3000转染试剂 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 假病毒中和 | 荧光素酶检测系统 | Promega | -- |
| 96孔板 | Greiner Bio-One | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 疫苗免疫 | 疫苗剂量（108或109 vp）、免疫途径（肌肉注射）、小鼠品系（BALB/c或K18-hACE2）、年龄（6-8周龄或6-8月龄） 阅读提示：Methods: Mice immunization; In vivo challenge studies with VOC |
| 攻毒实验 | 攻毒病毒株（Gamma、Delta、Omicron BA.1）、攻毒剂量（TCID50）、攻毒途径（鼻内）、取样时间（攻毒后第3或4天） 阅读提示：Methods: In vivo challenge studies with VOC |
| 中和实验 | 假病毒类型（VSV假病毒）、靶细胞（HEK293T-ACE2）、血清稀释、孵育时间（20-24小时）、计算ID50 阅读提示：Methods: Construction of VOC-matched pseudoviruses and neutralization assays |
| 病毒载量检测 | 组织样本（肺、脑）、RNA提取试剂盒、qRT-PCR试剂盒、检测基因（E基因）、计算方法 阅读提示：Methods: Viral load assessment |