样本收集与抗体水平检测
评估加强免疫后抗RBD IgG抗体水平
收集50名泰国医护人员血浆,使用ARCHITECT i System检测抗RBD IgG,并按水平分组。
The Occluded Epitope Residing in Spike Receptor-Binding Motif Is Essential for Cross-Neutralization of SARS-CoV-2 Delta Variant.
包含人体血浆样本的抗体检测(ARCHITECT、NeutraLISA、竞争ELISA)和体外结合实验(间接ELISA、Western blot)及结构分析,但缺乏功能验证(如活病毒中和实验)和动物模型。
医护人员血浆样本(n=50)
样本:50名泰国医护人员,两剂CoronaVac后BNT162b2加强免疫14天 抗体检测:ARCHITECT i System(Abbott)检测抗RBD IgG 中和抗体:SARS-CoV-2 NeutraLISA(EUROIMMUN)和内部竞争ELISA 单抗:40591-MM43,针对RBD WT、Delta、W436R突变体的结合活性 统计:Spearman和Pearson相关分析,p<0.05为显著
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估加强免疫后抗RBD IgG抗体水平
收集50名泰国医护人员血浆,使用ARCHITECT i System检测抗RBD IgG,并按水平分组。
比较不同方法检测中和抗体水平,评估总体中和抗体和特异性表位抗体
使用SARS-CoV-2 NeutraLISA和内部竞争ELISA检测血浆中和抗体,并进行相关性分析。
验证40591-MM43单抗对RBD WT、Delta和W436R突变体的结合能力
通过间接ELISA和Western blot分析40591-MM43与WT、Delta和W436R RBD蛋白的结合。
定位关键残基W436在RBD构象中的位置和可及性
使用PDB结构6m0j、7DDD和7DDN,分析RBD与ACE2相互作用残基及W436的溶剂可及性。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 抗体检测 | ARCHITECT i系统 | Abbott | -- |
| 中和抗体检测 | SARS-CoV-2 NeutraLISA | EUROIMMUN | EI2606-9601-4 |
| 竞争ELISA和间接ELISA | SARS-CoV-2刺突蛋白RBD-His重组蛋白 | Sino Biological | 40592-V08H115 |
| 刺突中和单克隆抗体(40591-MM43) | Sino Biological | 40591-MM43 | |
| 竞争ELISA | HRP偶联山羊抗小鼠免疫球蛋白 | KPL | 074-1807 |
| TMB底物 | Seracare | 5120-0076 | |
| 间接ELISA | 96孔微孔板 | Greiner Bio-One | 762071 |
| SARS-CoV-2刺突蛋白RBD-His重组蛋白(WT) | Sino Biological | 40592-V08H115 | |
| SARS-CoV-2刺突蛋白RBD-His重组蛋白(Delta) | Sino Biological | 40592-V08H9 | |
| SARS-CoV-2刺突蛋白RBD-His重组蛋白(W436R) | Sino Biological | 40592-V08H31 | |
| Western blot | SARS-CoV-2刺突蛋白RBD小鼠多克隆抗体 | Sino Biological | 40592-MP01 |
| 抗6x His单克隆抗体 | Invitrogen | MA1-21315 | |
| KPL LumiGLO®化学发光底物系统 | Seracare | 5430-0040 | |
| ChemiDoc™ MP成像系统 | Bio-Rad | -- | |
| 间接ELISA | 微孔板读数仪 | Hercuvan Lab Systems | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本收集 | 受试者:泰国医护人员(n=50),两剂CoronaVac后BNT162b2加强,采血时间:第三次接种后14天,EDTA抗凝血浆 阅读提示:Materials and Methods 2.1、2.3 |
| 抗RBD抗体检测 | ARCHITECT i System (Abbott) 检测IgG,AU/mL 阅读提示:Materials and Methods 2.5、Results 3.1 |
| 中和抗体检测 | SARS-CoV-2 NeutraLISA (EUROIMMUN) 和内部竞争ELISA(包被RBD-His,血浆1:5,mAb 40591-MM43 2.5 μg/mL) 阅读提示:Materials and Methods 2.6、2.7 |
| 单抗结合实验 | 间接ELISA:包被1 μg/mL RBD蛋白;Western blot:50 μg/mL蛋白,一抗浓度0.5 μg/mL(anti-6x His)或1 μg/mL(40591-MM43) 阅读提示:Materials and Methods 2.8、2.9、Results 3.3、3.5 |
| 结构分析 | PDB ID: 6m0j, 7DDD, 7DDN;PRODIGY, MISSENSE 3D, UCSF Chimera 阅读提示:Materials and Methods 2.10、Results 3.4 |