SARS-2-S与胆固醇和HDL的结合分析
验证SARS-2-S是否具有胆固醇结合能力及其与HDL的相互作用。
通过MST、SPR和肽-胆固醇结合实验，检测SARS-2-S蛋白与胆固醇、HDL的结合，并定位结合位点。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
HDL清道夫受体B型1促进SARS-CoV-2进入细胞
HDL-scavenger receptor B type 1 facilitates SARS-CoV-2 entry
实验完整度
高实验包括分子结合（MST、SPR、多肽结合）、细胞感染（假病毒与活病毒）、基因敲低/过表达、药理抑制及组织免疫组化多个层级，并包含功能与机制验证。
主要模型
Huh-7细胞 Vero E6细胞 293T细胞 Hepa 1-6细胞
重点核对
HDL浓度（0.1% FBS作为对照，HDL 1-12 μg/ml） SR-B1表达水平（siRNA敲低或过表达） ACE2共表达 SR-B1抑制剂（ITX 5061和BLT-1）使用的浓度（25 μM） 感染时间点（如3小时和24小时）
摘要
导致持续的新型冠状病毒病（COVID-19）大流行的严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）通过病毒刺突蛋白（SARS-2-S）与细胞表面受体血管紧张素转换酶2（ACE2）结合感染宿主细胞。在这里，我们表明高密度脂蛋白（HDL）清道夫受体B型1（SR-B1）促进SARS-CoV-2的ACE2依赖性进入。我们发现SARS-2-S的S1亚基与胆固醇结合，并可能通过与HDL成分结合在体外增强病毒摄取。SR-B1表达通过增强病毒附着，促进SARS-CoV-2进入表达ACE2的细胞。用单克隆抗体阻断SARS-2-S1上的胆固醇结合位点，或用药理性SR-B1拮抗剂处理培养细胞，可抑制HDL增强的SARS-CoV-2感染。我们进一步表明，SR-B1在人类肺组织和一些肺外组织中与ACE2共表达。我们的发现揭示SR-B1作为促进SARS-CoV-2进入的宿主因子，可能有助于解释病毒嗜性，确定COVID-19与脂蛋白代谢之间可能的分子联系，并强调SR-B1作为干扰SARS-CoV-2感染的潜在治疗靶点。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- SR-B1是否作为SARS-CoV-2进入宿主细胞的辅助因子，以及其机制是否涉及HDL与刺突蛋白的相互作用。
- 核心机制
- HDL与SARS-2-S的S1亚基结合，可能通过SR-B1介导的脂质转移增加细胞膜胆固醇含量，从而增强病毒附着和ACE2依赖性进入。
- 主要证据
- 体外实验显示HDL增强假病毒和活病毒感染；SR-B1敲低降低而过表达增强感染；SR-B1与ACE2共表达显著提高易感性；SR-B1抑制剂阻断HDL增强的感染；免疫组化显示肺和部分肺外组织共表达SR-B1与ACE2。
- 研究意义
- SR-B1可能作为SARS-CoV-2进入的辅助因子，为解释病毒嗜性提供新线索，并作为潜在抗病毒治疗靶点。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
HDL对SARS-CoV-2进入的影响
检测HDL是否增强SARS-CoV-2的细胞进入和感染。
用假病毒和活病毒感染Huh-7细胞，在含HDL或对照条件下检测进入效率和病毒复制。
SR-B1表达对SARS-CoV-2感染性的影响
验证SR-B1是否参与SARS-CoV-2的进入。
通过过表达或siRNA敲低SR-B1，检测假病毒和活病毒感染的变化。
SR-B1与ACE2共表达对易感性的影响
确定SR-B1和ACE2共表达是否增强细胞对SARS-CoV-2的易感性。
在293T、Hepa 1-6和MDCK细胞中共转染ACE2和SR-B1，评估假病毒感染。
SR-B1介导的病毒附着和进入
探索SR-B1是否通过增强病毒附着和进入来发挥作用。
通过免疫染色和流式细胞术检测SR-B1与病毒粒子的共定位及附着，并通过抑制剂实验验证。
组织中共表达分析
检查SR-B1和ACE2在人体组织中的共表达情况。
使用免疫组化对正常人体器官组织芯片进行染色，检测SR-B1和ACE2的表达与定位。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
分子相互作用分析
病毒感染与进入分析
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 蛋白表达与纯化 | SARS-2-S蛋白 | Acro Biosystems | SPN-C52H9 |
| SARS-2-S1蛋白 | Acro Biosystems | S1N-C52H3 | |
| SARS-2-S2蛋白 | Acro Biosystems | S2N-C52H5 | |
| SARS-2-RBD蛋白 | Acro Biosystems | SPD-C52H3 | |
| 药物处理 | ITX 5061 | MedChemExpress | HY-19900 |
| BLT-1 | Sigma-Aldrich | SML0059 | |
| 脂质结合实验 | 胆固醇 | Sigma-Aldrich | C8667 |
| 菜油甾醇 | Sigma-Aldrich | C5157 | |
| 表胆固醇 | Sigma-Aldrich | R207349 | |
| 细胞培养 | DMEM（高糖） | Sigma-Aldrich | D5796 |
| 人血清 | Gibco | A3969001 | |
| 胎牛血清 | Gibco | A3160901 | |
| 转染 | Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 11668-027 |
| 免疫组织化学 | 人正常器官组织芯片 | Biomax | MNO661 |
| MST | Monolith His-Tag标记试剂盒 | NanoTemper Technologies | MO-L018 |
| NT-647染料 | NanoTemper Technologies | MO-L008 | |
| 标准玻璃毛细管 | NanoTemper Technologies | MO-K022 | |
| SPR | OpenSPR-XT系统 | Nicoya Lifesciences | -- |
| NTA传感器 | Nicoya Lifesciences | SEN-AU-100-3-NTA | |
| Western blot | 抗Flag抗体 | Sigma-Aldrich | A8592 |
| 抗HA抗体 | Sigma-Aldrich | H9658 | |
| 抗SR-B1抗体 | Abcam | ab217318 | |
| 抗ACE2抗体 | Abcam | ab108252 | |
| 抗α-微管蛋白抗体 | Sigma-Aldrich | T9026 | |
| 免疫组化 | ACE2抗体 | Abcam | ab108252 |
| SR-B1抗体 | Abcam | ab217318 | |
| 流式 | 流式用ACE2抗体 | Proteintech | 21115-1-AP |
| PE抗His抗体 | BioLegend | 362603 | |
| 流式用SR-B1抗体 | BioLegend | 363208 | |
| 共聚焦 | SARS-2-S单克隆抗体 | GeneTex | GTX632604 |
| SARS-2-S1抗体 | Sino Biological | 40150-T62-COV2 | |
| 免疫沉淀 | Flag-SARS-2-S | -- | -- |
| 细胞培养 | Huh-7细胞系 | JCRB | 0403 |
| HeLa-hACE2细胞系 | Beijing Vitalstar Biotechnology | 012 | |
| 293T细胞系 | ATCC | CRL-3216 | |
| Vero E6细胞系 | ATCC | CRL-1568 | |
| MDCK细胞系 | ATCC | CCL-34 | |
| Hepa 1-6细胞系 | ATCC | CRL-1830 | |
| 荧光测量 | Cary Eclipse荧光分光光度计 | Agilent Technologies | -- |
| Western blot | Tanon 5200化学发光成像系统 | Tanon | -- |
| RT-qPCR | 病毒RNA提取试剂盒 | Qiagen | 52906 |
| 一步法PrimeScript RT-PCR试剂盒 | Takara | -- | |
| Applied Biosystems 7500实时荧光定量PCR系统 | Applied Biosystems | -- | |
| 流式 | Invitrogen Attune NxT声波聚焦流式细胞仪 | Invitrogen | -- |
| 病毒检测 | SARS-CoV-2毒株 | -- | BetaCoV/Beijing/IME-BJ01/2020 |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 分子结合实验 | SARS-2-S蛋白浓度、HDL浓度、胆固醇浓度、缓冲液成分（如Fos-choline 13浓度） 阅读提示：Methods部分中的MST、SPR和肽结合实验小节 |
| 病毒感染实验 | 细胞系（Huh-7）、HDL浓度、感染时间、MOI、检测时间点（3h/24h）、RT-qPCR引物和探针序列 阅读提示：Methods部分中的感染实验和RT-qPCR小节，以及图例 |
| SR-B1功能和抑制实验 | siRNA序列、转染试剂、ITX 5061和BLT-1浓度、预孵育时间 阅读提示：Methods部分中的细胞培养和转染、感染实验、化合物处理，以及图例 |
| 组织表达分析 | 组织芯片类型、抗体稀释度、抗原修复条件 阅读提示：Methods部分中的免疫组化小节 |