临床相关性分析
评估巨噬细胞浸润与癌症早期复发和血管侵犯的关联性。
分析431例HCC患者及TCGA 20种癌症4145例数据中CD68+巨噬细胞浸润与复发、血管侵犯的相关性。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
靶向NF-κB信号的miRNome协调巨噬细胞触发的癌症转移和复发
miRNome targeting NF-κB signaling orchestrates macrophage-triggered cancer metastasis and recurrence
实验完整度
高包含临床样本分析、细胞系体外迁移实验、小鼠原位肝癌模型以及机制验证（双荧光素酶报告、Western blot）等层级。
主要模型
人肝癌细胞系HepG2 人正常肝细胞HL-7702 小鼠肝癌细胞系Hepa1-6 C57BL/6小鼠原位肝癌模型
重点核对
DICER1表达与巨噬细胞浸润对早期复发和血管侵犯的交互影响 TAM-CM刺激后NF-κB RELA核转位及细胞迁移 miR-26b-5p对TAK1和TAB3 3'UTR的荧光素酶活性影响 miR-26b-5p在体内对肝转移的抑制作用 巨噬细胞耗竭或TNF-α/IL-1β敲低对肝转移的影响
摘要
肿瘤内在特征是否以及如何决定巨噬细胞引发的转移仍然难以捉摸。在这里，我们通过对20种人类癌症的7,477名患者数据进行详细研究发现，只有13.8%±2.6%/27.9%±3.03%的巨噬细胞高浸润指数患者表现出早期复发/血管侵犯。与此同时，虽然巨噬细胞增强了各种肝癌细胞的运动性，但其增强强度显著异质。我们确定恶性Dicer（一种将miRNA前体切割成成熟miRNA的核糖核酸酶）的表达决定了巨噬细胞引发的转移。机制上，癌细胞中Dicer的下调导致靶向NF-κB信号的miRNome缺陷，这反过来增强了癌细胞对巨噬细胞相关炎症信号的反应能力，最终促进转移。重要的是，转运miR-26b-5p（肝细胞癌中靶向NF-κB信号的最有潜力的miRNA）可以有效逆转体内巨噬细胞引发的肝癌转移。我们的结果为Dicer引发的miRNome与癌症免疫微环境之间的串扰提供了见解，并表明重塑恶性细胞miRNome的策略可能克服炎症细胞的促肿瘤活性。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 肿瘤内在特征（如Dicer表达的异质性）是否以及如何决定巨噬细胞引发的肿瘤转移？
- 核心机制
- 癌细胞中Dicer下调导致靶向NF-κB信号的miRNome（包括miR-26b-5p等）缺陷，解除对NF-κB通路负调控，增强癌细胞对巨噬细胞来源的TNF-α和IL-1β等炎症信号的应答，从而促进转移。
- 主要证据
- 临床样本分析显示巨噬细胞预测价值有限；细胞实验显示TAM-CM迁移促进效应依赖Dicer；机制实验证明miR-26b-5p靶向TAK1/TAB3；体内实验显示恢复miR-26b-5p或敲低TNF-α/IL-1β逆转转移。
- 研究意义
- 揭示恶性细胞miRNome与肿瘤免疫微环境的串扰，提示重塑恶性细胞miRNome可能克服炎症细胞的促肿瘤活性。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
体外细胞模型检测
验证巨噬细胞条件培养基（TAM-CM）对肝癌细胞迁移的影响及细胞异质性。
用TAM-CM处理多种肝癌细胞和正常肝细胞，检测迁移能力变化。
Dicer表达调控实验
明确Dicer表达是否决定巨噬细胞诱导的迁移。
在HL-7702中敲低DICER1，在HepG2中过表达DICER1，检测迁移变化。
NF-κB通路激活检测
验证TAM-CM是否激活NF-κB信号，并受Dicer表达影响。
检测TAM-CM处理后RELA磷酸化及核转位。
miRNA靶点鉴定
鉴定靶向NF-κB信号的miRNA及其直接靶基因。
筛选下调miRNA，验证miR-26b-5p对TAK1/TAB3的靶向作用。
炎症因子作用验证
验证巨噬细胞来源的TNF-α和IL-1β参与促转移作用。
用重组细胞因子刺激细胞，并用中和抗体阻断。
体内动物模型验证
评估Dicer或miR-26b-5p对小鼠肝癌转移的影响。
将改装细胞原位接种小鼠肝脏，注射巨噬细胞耗竭抗体或siRNA脂质体，分析肺转移。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Gibco | -- |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 细胞迁移实验 | Boyden腔 | Corning | 3422 |
| Western blot | PVDF膜 | -- | -- |
| ECL试剂盒 | -- | -- | |
| 实时PCR | TRIzol试剂 | Invitrogen | -- |
| MMLV逆转录酶 | Yeasen | -- | |
| SYBR Green实时PCR预混液 | Abm | -- | |
| miRNA检测 | Taqman miRNA逆转录试剂盒 | Applied Biosystems | 4366596 |
| TaqMan MicroRNA检测试剂盒 | Applied Biosystems | A25576 | |
| RNA干扰 | Lipofectamine RNAiMAX转染试剂 | Invitrogen | 13778150 |
| 基因过表达 | pCDH-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro载体 | System Biosciences | -- |
| 病毒包装 | psPAX2包装质粒 | Addgene | -- |
| pVSV-G包膜质粒 | Addgene | -- | |
| 聚乙烯亚胺 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 慢病毒转导 | 聚凝胺 | Sigma-Aldrich | H9268 |
| 双荧光素酶报告 | pGL3cm载体 | Promega | -- |
| pRL-TK载体 | Promega | -- | |
| 动物实验 | 抗CSF1R抗体 | -- | -- |
| 基质胶 | R&D Systems | 3432-005-01 | |
| 脂质体制备 | DOTAP脂质 | Avanti Lipids | 790310 |
| 胆固醇 | -- | -- | |
| DPPC | Avanti | 850355P | |
| DOPC | Avanti | 850375P | |
| ELISA | ELISA试剂盒 | eBioscience | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 临床样本分析 | 巨噬细胞浸润指标（CD68）与患者早期复发、血管侵犯的关联；DICER1表达分层 阅读提示：Methods: Patients and specimens; Figure legends 1 and 2 |
| 细胞迁移实验 | TAM-CM处理浓度和时间（24小时）；细胞数量（3×10^4） 阅读提示：Methods: Cell migration assay; Figure legends 1 and 4 |
| Dicer表达调控 | shDICER1和DICER1过表达载体构建与转导效率 阅读提示：Methods: Construction of viral vectors and shDICER1 or DICER1 cell lines |
| NF-κB激活检测 | RELA磷酸化检测时间点（30分钟）；抗体和条件 阅读提示：Methods: Immunoblotting; Figure legends 3 and 5 |
| miRNA靶点验证 | 双荧光素酶报告基因检测条件（共转染量、时间） 阅读提示：Methods: Vectors and luciferase reporter assay; Figure legend 5 |
| 炎症因子刺激 | TNF-α和IL-1β浓度（20 ng/mL）及处理时间 阅读提示：Methods: Cell migration assay; Figure legend 6 |
| 体内动物模型 | 细胞接种数量（1×10^6）、αCSF1R抗体剂量（8 mg/kg）和给药时间 阅读提示：Methods: Animal experiments; Figure legends 7 |