细菌细胞壁与外膜生物合成的协调机制

Coordination of bacterial cell wall and outer membrane biosynthesis

作者信息Katherine R Hummels, Samuel P Berry, Zhaoqi Li, Atsushi Taguchi, Joseph K Min, Suzanne Walker, Debora S Marks, Thomas G Bernhardt
PMID36859542
期刊Nature
发布时间2023-03
DOI10.1038/s41586-023-05750-0

摘要

革兰氏阴性菌的细胞包膜由肽聚糖细胞壁和外膜组成,是药物进入的主要屏障,也是其固有抗生素耐药性的关键决定因素。尽管肽聚糖和外膜的合成与组装通路已较为明确,但这两个关键表面层的生物合成如何协调尚不清楚。本研究在革兰氏阴性病原菌铜绿假单胞菌中,发现并报道了肽聚糖和脂多糖合成通路中关键酶(MurA 和 LpxC)之间存在直接的、特异性的调控性相互作用。研究显示,MurA 在细胞和纯化系统中均能直接刺激 LpxC 的活性。这些结果支持了一个模型,即在许多变形菌门物种中,肽聚糖和外膜层的组装是通过连接其各自合成通路中关键酶的活性来协调的。

实验方法

产品清单

名称品牌货号
Q5聚合酶NEBM0492L
GoTaq Green DNA聚合酶PromegaM7123
PurePlasmid小提试剂盒CW BiosciencesCW0500M
DNA纯化试剂盒CW BiosciencesCW2301M
Taq聚合酶NEBM0267L
DpnI限制性内切酶NEBR0176L
0.025微米混合纤维素酯膜MilliporeVSWP02500
NEB-5-alpha电感受态大肠杆菌NEBC2989K
SOC复苏培养基NEBB9020S
离心机----
Qsonica Q800R3超声破碎仪QsonicaQ800R3
Non-Interfering蛋白测定试剂盒G-biosciences786-005
Bio-Rad Trans-Blot Turbo转印系统Bio-Rad--
抗His标签抗体GenScriptA00186-100
抗Flag标签抗体SigmaF7425
抗RpoA抗体BioLegend663104
过氧化物酶标记的山羊抗小鼠抗体Rockland610-1302
兔TrueBlot:抗兔IgG HRP抗体Rockland18-8816-33
SuperSignal West Pico PLUS化学发光底物Thermo34580
Azure Biosystems C600成像仪Azure BiosystemsC600
Ni-NTA树脂Qiagen30230
Q125 Qsonica超声破碎仪QsonicaQ125
Anti-Flag M2磁珠Sigma-AldrichM8823
Flag肽Millipore SigmaF3290
ActaPure系统----
Superdex 200 10/300 GL色谱柱----
离心过滤管AmiconUFC801024
Tecan Infinite M-Plex酶标仪TecanM-Plex
尼康D3400相机NikonD3400
尼康AF-S micro NIKKOR 40毫米镜头Nikon40-mm
蛋白酶KNEBP8107S
Criterion XT Bis-Tris胶Bio-Rad3450124
Bio-Rad ChemiDoc MP成像系统Bio-RadMP
尼康Eclipse 50i显微镜Nikon50i
Photometrics CoolSNAP HQ2相机PhotometricsHQ2
Fiji图像分析平台--2.3.0/1.53q41
MicrobeJ插件--5.13I
Prism软件GraphPad Software, LLC--
旋转蒸发仪----
安捷伦1200系列HPLC系统Agilent Technologies1200
安捷伦6520 Q-TOF质谱仪Agilent6520
液相色谱-串联质谱系统----
沃特世Symmetry C18色谱柱Waters--
安捷伦MassHunter工作站定性分析软件AgilentB.06.00
AlphaFold--19
ChimeraX--1.1.1
EVcomplex----
EVcouplings--v0.0.5
jackhammer--v3.1b2
sklearn--v1.0.2
ETE3--v1.3.2
FastTree--2.1.11
生命之树交互式工具--v5