临床队列研究设计
评估孟鲁司特与万古霉素相关AKI发生率的关系。
回顾性纳入2020-2024年间接受静脉万古霉素≥3天的成人患者，排除囊性纤维化和肾功能障碍者，比较使用孟鲁司特与未使用者的AKI发生率，采用RIFLE标准定义AKI。
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孟鲁司特降低万古霉素相关急性肾损伤
Reduction of Vancomycin-Associated Acute Kidney Injury With Montelukast
实验完整度
中包含临床回顾性队列研究（患者样本、多因素回归、倾向性加权）和体外BUMPT细胞实验（细胞活力、Western blot机制验证），但缺乏动物模型和前瞻性验证，实验完整度中等。
主要模型
BUMPT小鼠近端肾小管细胞 接受万古霉素治疗的成人患者（回顾性队列）
重点核对
患者是否接受孟鲁司特（10mg口服每日） 万古霉素治疗天数≥3天 RIFLE标准定义AKI 体外实验万古霉素IC50（约8.25 mg/mL） 孟鲁司特浓度（3 mg/L）对细胞活力的影响
摘要
背景
万古霉素是治疗严重β-内酰胺类耐药革兰阳性菌感染最常用的抗菌药物之一，但其使用与肾毒性相关。临床前模型中已报道辅助使用孟鲁司特可减少急性肾损伤（AKI）。本研究旨在确定孟鲁司特是否与万古霉素相关AKI的发生率降低相关。
方法
这项回顾性队列研究纳入了2020年1月至2024年1月期间接受静脉万古霉素治疗的成年患者。采用RIFLE标准（风险、损伤、衰竭、功能丧失和终末期肾病）来识别AKI病例。此外，建立了临床前万古霉素相关肾毒性模型，以探究可能的肾脏保护机制。
结果
接受孟鲁司特的患者（n=110）与对照组（n=330）相比，AKI发生率分别为3例（2.7%）和35例（10.6%），差异有统计学意义（P=0.01）。多变量逻辑回归分析显示，体重（比值比[OR]，1.02；95% CI，1.006–1.03；P=0.005）和重症监护病房入住（OR，6.88；95% CI，2.96–18.8；P<0.001）与AKI独立相关，而孟鲁司特（OR，0.26；95% CI，0.06–0.77；P=0.03）和男性为保护因素（OR，0.41；95% CI，0.19–0.85；P=0.02）。我们的体外模型还揭示，辅助使用孟鲁司特可通过激活p62/KEAP-1/HO-1抗氧化通路减少近端肾小管细胞的损伤。
结论
我们的研究表明，在万古霉素治疗期间使用孟鲁司特可能对AKI具有保护作用，这可能减少患者伤害和住院费用。需要进一步的研究来前瞻性验证我们的发现。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 孟鲁司特与万古霉素相关急性肾损伤（AKI）发生率降低是否相关，以及其可能的肾脏保护机制。
- 核心机制
- 孟鲁司特通过激活p62/KEAP-1/HO-1抗氧化通路，减轻万古霉素诱导的近端肾小管细胞氧化应激和凋亡，从而发挥肾脏保护作用。
- 主要证据
- 回顾性队列中，孟鲁司特组AKI发生率（2.7%）显著低于对照组（10.6%），多因素分析显示孟鲁司特为保护因素；体外BUMPT细胞实验显示孟鲁司特增加细胞活力、上调HO-1并降低cleaved caspase 3。
- 研究意义
- 提示孟鲁司特可能作为辅助治疗降低万古霉素相关AKI风险，减少患者伤害和住院费用，并可能扩展其他肾毒性药物的辅助保护应用。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
体外细胞活力实验
验证万古霉素对肾小管细胞活力的影响及孟鲁司特的保护作用。
使用BUMPT细胞，MTT法测定不同浓度万古霉素（1-15 mg/mL）处理20小时后的细胞活力，确定IC50；随后在万古霉素IC50浓度下加入不同浓度孟鲁司特（0.5-7 mg/L），评估其对细胞活力的改善。
机制蛋白检测
探讨孟鲁司特保护作用的分子机制，聚焦氧化应激、凋亡和自噬通路。
BUMPT细胞以万古霉素IC50和孟鲁司特最佳浓度（3 mg/L）处理20小时，收集蛋白，通过Western blot检测p62、KEAP1、LC3、HO-1、cleaved caspase 3等蛋白水平。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 体外细胞实验 | 盐酸万古霉素 | Sigma-Aldrich | -- |
| 孟鲁司特钠 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 细胞培养 | 杜氏改良Eagle培养基 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 胎牛血清 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Hank平衡盐溶液 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 蛋白提取 | Pierce RIPA裂解液 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Western blot | KEAP1抗体 (8047) | Cell Signaling Technology | 8047 |
| LC3 A/B抗体 (12741) | Cell Signaling Technology | 12741 | |
| 磷酸化SQSTM1/p62抗体 (16177) | Cell Signaling Technology | 16177 | |
| 血红素加氧酶1抗体 (43966) | Cell Signaling Technology | 43966 | |
| β-肌动蛋白抗体 (4970) | Cell Signaling Technology | 4970 | |
| 半胱天冬酶3抗体 (14220) | Cell Signaling Technology | 14220 | |
| 裂解的半胱天冬酶3抗体 (9664) | Cell Signaling Technology | 9664 | |
| 抗兔IgG, HRP偶联抗体 (7074) | Cell Signaling Technology | 7074 | |
| 印迹级封闭剂 | Bio-Rad Laboratories | -- | |
| 10× Tris/甘氨酸缓冲液 | Bio-Rad Laboratories | -- | |
| 4× Laemmli样品缓冲液 | Bio-Rad Laboratories | -- | |
| 0.2 μm PVDF膜 | Bio-Rad Laboratories | -- | |
| 细胞活力检测 | 细胞增殖试剂盒I (MTT, 11465007001) | Roche | 11465007001 |
| Western blot | Clarity Western ECL底物 | Bio-Rad Laboratories | -- |
| ChemiDoc MP成像系统 | Bio-Rad Laboratories | -- | |
| 数据分析 | ImageJ软件（版本1.53t） | National Institutes of Health | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 临床队列 | 患者纳入标准（年龄≥18岁，静脉万古霉素≥3天，排除肾功能障碍）；孟鲁司特剂量（10mg口服每日）；AKI定义采用RIFLE标准；主要终点AKI发生率；多变量模型中的协变量（体重、ICU入住、性别等）。 阅读提示：Methods部分‘Clinical Study Design’和‘Statistics’，以及Results部分‘Clinical Study’和Table 1、Table 2。 |
| 细胞活力实验 | BUMPT细胞培养条件（DMEM+10%FBS，实验时使用无血清DMEM:F-12）；万古霉素处理浓度范围（1-15 mg/mL）和时间（20小时），IC50约为8.25 mg/mL；孟鲁司特浓度（0.5-7 mg/L），最佳浓度为3mg/L；MTT实验步骤和重复次数。 阅读提示：Methods部分‘Cell Viability’和‘Chemicals and Reagents’；结果部分‘Cell Viability Assay’。 |
| 机制蛋白检测 | 处理条件（万古霉素IC50和3mg/L孟鲁司特处理20小时）；蛋白提取（RIPA裂解，35μg蛋白上样）；Western blot检测的蛋白（p-p62, KEAP1, LC3, HO-1, cleaved caspase 3）及抗体信息；内参β-actin；定量方法（ImageJ）和重复次数（n=3或4）。 阅读提示：Methods部分‘Mechanisms of Acute Renal Injury and Renal Protection’和‘Chemicals and Reagents’；结果部分‘Mechanisms of Acute Renal Injury and Renal Protection’。 |